Hvordan man tæller kolonier i mikrobiologi

En af de klassiske måder at bestemme koncentrationen af ​​mikrober i en prøve er at fortynde prøven, dyrke mikroberne på plader og tælle kolonierne. De belagte mikrober vokser fra en kolonidannende enhed bestående af en eller flere celler i en synlig koloni, der kan ses og tælles. Bakterier er den mest almindelige mikrobe at vurdere ved hjælp af pladetællinger. Kolonistællinger bruges til at detektere og tælle mikrober i jord, vand og mad. Protokoller til tælling af kolonier understreger en præcis og metodisk tilgang.

Udtynding af prøver, plating og inkubation

Hvis du blot smeder en mikrobeprøve på en agarplade, vil du se så mange kolonidannende enheder, som de enkelte kolonier vil blande sammen, hvilket gør dem umulige at tælle. For at løse dette problem blandes prøven i et flydende medium, tager en lille smule af den blanding og fortynder den yderligere. Gentag denne proces seks til 10 gange. Spred den endelige fortynding på en agarplade og inkubér den i fire til syv dage, før du tæller kolonierne.

Manuel tælling

Det primære trick i tælling af kolonier er at tælle hver kolonidrik en gang. En fremgangsmåde er at indstille Petri-skålen på en grid baggrund og tælle kolonierne i hver gridcelle og flytte i et metodisk mønster gennem alle cellerne. Markering af tællede kolonier på bagsiden af ​​Petri-skålen kan også være en nyttig tilgang. Generelt skal du tælle mindst tre plader; brug kun plader indeholdende 30 til 300 kolonier for at gøre robuste afledninger, foreslår Microbiology Network, et firma, der yder rådgivning til laboratorier og producenter. Plader med kolonier, der er for mange til at tælle eller med for få kolonier, skal omplanteres fra en ny fortynding.

Automatiseret tælling

Menneskelig fejl tilføjer til tiden, der er involveret i tælling af kolonier manuelt . For at forbedre både nøjagtighed og effektivitet skal du placere Petri-skålen i en automatisk kolonitæller. Automatiserede kolonistællere tager et billede af skålen, adskiller kolonierne fra baggrunden og bruger derefter en algoritme til at tælle kolonierne på pladen. Algoritmerne kan have vanskeligheder med at differentiere kolonier, når to eller flere kolonier rører ved kanterne, så dette er et område med løbende softwareudvikling.

At tælle mere kompliceret

Nøjagtigheden af ​​beregning af mikrobe tæthed fra kolonitællinger har nogle begrænsninger. Kolonidannende enheder kan være en enkelt celle, en kæde af celler eller et helt klump af celler. Antagelsen er, at en koloni repræsenterer en celle, så koncentrationer beregnet ud fra kolonitællinger kan være lave. Forskellige mikrober har forskellige vækstbetingelser, og kolonierne på pladen repræsenterer kun de mikrober, der trives på vækstmedierne under disse inkubationsbetingelser. Derudover registrerer kolonitælling ikke døde celler, en vigtig overvejelse, når du har brug for koncentrationen af ​​celler i den oprindelige prøve.