Sådan tælles kolonier i mikrobiologi

En af de klassiske måder at bestemme koncentrationen af mikrober i en prøve er at fortynde prøven, dyrke mikroberne på plader og tælle kolonierne. De belagte mikrober vokser fra en kolonidannende enhed bestående af en eller flere celler til en synlig koloni, der kan ses og tælles. Bakterier er den mest almindelige mikrobe til vurdering af pladetællinger. Kolonitællinger bruges til at detektere og tælle mikrober i jord, vand og mad. Protokoller til tælling af kolonier understreger en nøjagtig og metodisk tilgang.
Fortyndingsprøver, plettering og inkubation

Hvis du blot smør en mikrobeprøve på en agarplade, vil du se så mange kolonidannende enheder, at individuelle kolonier vil blandes sammen, hvilket gør dem umulige at tælle. For at løse dette problem blandes prøven i et flydende medium, tag en lille mængde af denne blanding og fortynd den yderligere. Gentag denne proces seks til 10 gange. Spred den endelige fortynding på en agarplade og inkuber den i fire til syv dage, før du tæller kolonierne.
Manuel optælling

Det primære trick ved at tælle kolonier er at tælle hver kolonipunk en gang. En fremgangsmåde er at indstille petriskålen på en gitterbaggrund og tælle kolonierne i hver gittercelle og bevæge sig i et metodisk mønster gennem alle cellerne. Markering af tællede kolonier på bagsiden af petriskålen kan også være en nyttig tilgang. Generelt bliver du nødt til at tælle mindst tre plader; Brug kun plader, der indeholder 30 til 300 kolonier for at gøre robuste konklusioner, foreslår Microbiology Network, et firma, der leverer konsulenttjenester til laboratorier og producenter. Plader med kolonier, der er for mange til at tælle, eller med for få kolonier, skal omplaceres fra en ny fortynding.
Automated Counting

Menneskelig fejl øger den tid, der er involveret i at tælle kolonier manuelt. For at forbedre både nøjagtighed og effektivitet skal du placere Petri-skålen i en automatisk tællingsenhed for kolonier. Automatiske kolonitællere tager et billede af skålen, adskiller kolonierne fra baggrunden og bruger derefter en algoritme til at tælle kolonierne på pladen. Algoritmerne kan have vanskeligheder med at differentiere kolonier, når to eller flere kolonier rører ved kanterne, så dette er et område med kontinuerlig softwareudvikling.
Gør tælling mere kompliceret

Nøjagtigheden af beregning af mikrotæthed fra kolonitællinger har nogle begrænsninger. Kolonidannende enheder kan være en enkelt celle, en kæde af celler eller en hel klump af celler. Antagelsen er, at en koloni repræsenterer en celle, så koncentrationer beregnet ud fra kolonitællinger kan være lave. Forskellige mikrober har brug for forskellige vækstbetingelser, og kolonierne på pladen repræsenterer kun de mikrober, der trives på det vækstmedium under disse inkubationsbetingelser. Derudover registrerer kolonitælling ikke døde celler, hvilket er en vigtig overvejelse, når du har brug for koncentrationen af celler i den originale prøve.