Hvad er elektroforese i kloning?

Elektroforese er en teknik, der bruges til kloning, men ikke direkte i selve kloningsprocessen . Det er et kraftfuldt værktøj, der bruges til at analysere de DNA -fragmenter, der er involveret i kloning. Sådan fungerer det:

1. DNA -fragmentanalyse:

* Begrænsningsenzym fordøjelse: Under kloning bruger du restriktionsenzymer til at skære dit DNA af interesse og vektoren (plasmid) ved specifikke sekvenser. Dette genererer DNA -fragmenter i forskellige størrelser.

* gelelektroforese: DNA -fragmenterne adskilles derefter baseret på deres størrelse ved anvendelse af gelelektroforese. En gelmatrix (normalt agarose) anvendes, og en elektrisk strøm påføres. Mindre fragmenter rejser hurtigere og længere gennem gelen end større fragmenter.

* visualisering: DNA -fragmenterne visualiseres ved hjælp af et farvestof, der binder til DNA og fluorescerer under UV -lys. Dette giver dig mulighed for at se de forskellige bånd af DNA på gelen, der repræsenterer de forskellige størrelser af DNA -fragmenter.

2. Anvendelser i kloning:

* Bekræftelse af Restriction Digest: Elektroforese hjælper med at sikre, at restriktionsenzymerne har skåret dit DNA med succes på de rigtige steder, og at vektoren har de korrekte restriktionssteder for ligering.

* analyse af kloner: Efter ligering (sammenføjning af DNA -indsatsen med vektoren) bruges elektroforese til at verificere, at ligeringen har været en succes. Du kan sammenligne størrelsen på det rekombinante DNA -molekyle med det originale DNA -fragment og vektor.

* screeningsbiblioteker: Elektroforese kan bruges til at analysere DNA -indsatser i et bibliotek med kloner, hvilket hjælper med at identificere kloner med den ønskede indsats.

Kortfattet: Elektroforese er ikke en del af selve kernekloningsprocessen, men det er et vigtigt analytisk værktøj til at verificere de forskellige trin og sikre, at kloneksperimentet er vellykket.