Hvordan acetonealkohol påvirker Gram-farven:Affarvning for nøjagtig bakteriel identifikation

Af Marcia Spear
Opdateret 24. marts 2022

NikiLitov/iStock/GettyImages

Gram-farven er en grundlæggende mikrobiologisk teknik, der adskiller gram-positive fra gram-negative bakterier baseret på deres cellevægsstruktur og resulterende farve. Acetonealkohol spiller en central rolle som affarvningsmiddel, hvilket gør det muligt for den endelige farvedifferentiering at afsløre bakteriel identitet.

Primær plet – krystalviolet

Efter forberedelse af en bakteriel udstrygning påføres krystalviolet i 30 sekunder. På dette stadium fremstår både gram-positive og gramnegative celler ensartet lilla. En kort vask med vand fjerner overskydende farvestof, selvom noget krystalviolet forbliver bundet til de tykke peptidoglycanlag af gram-positive celler.

Mordant – Jod

Jod tilsættes i et minut og fungerer som et bejdsemiddel, der binder sig til krystalviolet og danner et uopløseligt krystalviolet-jodkompleks. Dette kompleks klæber stærkt til den robuste peptidoglycan fra gram-positive bakterier og sikrer den primære plet uden efterfølgende skylning med vand.

Affarvningsmiddel – Acetonealkohol

Acetone eller ethylalkohol bruges i 10-20 sekunder til at fjerne krystalviolet-jodkomplekset fra gramnegative celler. Alkoholen opløser den ydre lipidmembran, hvilket tillader farvestoffet at undslippe det tyndere peptidoglycanlag. Når afløbet er farveløst, stopper en skylning med vand affarvningen. Gram-positive celler bevarer den lilla plet, mens Gram-negative celler bliver farveløse.

Modfarve – Safranin

Safranin påføres i cirka et minut for at give kontrast, og farver de nu farveløse gramnegative bakterier lyserøde. Den mørkere krystalviolette maske sikrer, at Gram-positive celler forbliver lilla. En sidste skylning med vand fjerner overskydende safranin.

Referencer

• Microbiology Lab Manual TCCD South Campus; Barry Chess et al., 2009