Sådan beregnes Virus Titers

Beregning af virus titere er en kompliceret måde at sige, at en videnskabsmand tæller antallet af vira i en bestemt prøve. For at beregne virustitere inficerer videnskabsfolk plader af voksende bakterier med virusopløsninger i forskellige koncentrationer og beregner antallet af vira i den oprindelige løsning ved at tælle de bakterier, der er døde på grund af den virale infektion.

Seriefortyndinger < Sæt på handsker, udfyld 10 kulturrør med 9 ml bouillon og mærke dem "10 ^ -1," "10 ^ -2", "10 ^ -3" og så videre indtil "10 ^ - 10. "Disse rør vil blive brugt til virale seriefortyndinger. Da vira kan vokse til utroligt høje koncentrationer, skal du fortynde dem for at tælle dem effektivt. Hvert rør repræsenterer en 10 gange fortynding af virussen.

Tag 1 ml af den viruskultur, som du vil titer og overfør den til røret med titlen "10 ^ -1" med en pipette. Bland røret godt. Dette er din første ti-gange fortynding.

Tag 1 ml af den blandede kultur fra dit rør mærket "10 ^ -1" og overfør det med en ny pipette til det næste rør, mærket "10 ^ -2 . "Bland også dette rør.

Fortsæt dette mønster for at oprette en seriefortyndingsserie. Du vil ende med 9 rør på 9 ml og 1 rør på 10 ml. De virale belastninger i dine rør vil blive fortyndet hvor som helst fra 10 gange (dit første rør) eller 100 gange (dit andet rør) til ti milliarder gange (dit endelige rør).

Forberedelse af plader

Tag 10 rør af trypton blød agar og 10 Petri-plader og mærker dem til at svare til dine serielle fortyndingsrør.

Løsn hætten, så de ikke springer ud i varmen, og læg derefter agarrørene i et bægerglas af kogende vand. Dette vil smelte agaret, så du kan hælde det i Petri-plader.

Overfør rørene til et varmtvandsbad med mindst 45 grader Celsius. Dette sikrer, at din agar ikke størkner i rørene, før du har mulighed for at hælde den i en petriskål.

Tilføj to dråber bakteriekultur til din agar og bland det forsigtigt. Disse er de bakterier, der vil blive dræbt, så du kan tælle antallet af viruspartikler i en bestemt opløsning.

Tilsæt 1 ml af hver seriel fortynding til dets tilsvarende agarrør, mens rørene stadig er i varmt vand bad. For eksempel skal 1 ml af din 10 ^ -1 seriefortynding gå ind i agarrøret mærket "10 ^ -1."

Bland hvert rør og hæld derefter hvert rør i Petri-pladen med den tilsvarende etiket. Dette vil skabe et tyndt lag agar, der er blevet podet med bakterier og vira i hver plade. Lad pladerne vokse natten over i en inkubator.

Tæller og beregner Titers

Tag pladerne ud af inkubatoren og undersøg dem. Du bør se overskyede områder i hele pladen, hvor bakterier er vokset, bortset fra små klare pletter kaldet plaques. Disse plaques er patches af døde bakterier, og hver plaque repræsenterer en virus.

Find en plade, der har mellem 30 og 300 plaques og tæl det nøjagtige antal plaques på pladen.

Tag antal plaques på din tallerken og multiplicere med 10. Hvis du tællede 157 plaques, ville du få 1570.

Multiplicer det tal, du fik i det foregående trin ved omvendt af nummeret på din fortyndingsrør. Hvis f.eks. Pladen, du valgte, var 10 ^ -5-pladen, ville du formere 1570 med 10 ^ 5 for at få 157000000. Dette endelige tal er din virustiter og repræsenterer antallet af vira pr. Ml af din oprindelige kultur.

Advarsel

Pas på, når du arbejder med vira. Ikke alle vira er farlige, men du bør tage forholdsregler. Skift dine handsker ofte. Tør straks op med eventuelle spild og desinficer området.