Sådan beregnes HPLC opløsninger

Kemister bruger højtydende væskekromatografi eller HPLC til at adskille blandinger af forbindelser. Generelt består fremgangsmåden i at indsprøjte en prøve i en søjle, hvor den blandes med et eller flere opløsningsmidler. Forskellige forbindelser adsorberer, eller "sticker" til søjlen i forskellige grader; og når opløsningsmidlet skubber forbindelserne gennem søjlen, vil en af ​​komponenterne i blandingen forlade kolonnen først. Instrumentet detekterer forbindelserne, når de forlader søjlen og frembringer et kromatogram, der består af et plot med retentionstid på x-akse og signalintensitet fra detektoren på y-aksen. Når forbindelserne forlader søjlen, producerer de "toppe" i kromatogrammet. Generelt jo længere fra hinanden og jo smalere tinderne i kromatogrammet er jo højere opløsningen. Forskere anser en opløsning på 1,0 eller højere for at repræsentere en passende adskillelse.

Mål bredderne af to tilstødende toppe i kromatogrammet ved at bemærke, hvor x-akse-værdierne er ved bunden af ​​hver top. X-aksen repræsenterer retentionstid, normalt målt i sekunder. Hvis en top begynder på 15,1 sekunder og slutter ved 18,5 sekunder, er dens bredde (18,5 - 15,1) = 3,4 sekunder.

Bestem retentionstiderne ved at notere tiden, dvs. placeringen på x- akse, der svarer til placeringen af ​​toppene af toppene. Denne værdi vil normalt være omkring halvvejs mellem de to værdier, der bruges til at beregne bredden i trin 1. Eksemplet angivet i trin 1 ville for eksempel vise et maksimum på omkring 16,8 sekunder.

Beregn opløsningen R mellem to toppe ved

R = (RT1 - RT2) /[0,5 * (W1 + W2)],

hvor RT1 og RT2 repræsenterer retentionstiderne for toppe 1 og 2 og W1 og W2 repræsenterer bredderne af toppene taget på deres baser. Ved at fortsætte eksemplet fra trin 2 og 3 udviser en top en retentionstid på 16,8 sekunder og en bredde på 3,4 sekunder. Hvis den anden top viste en retentionstid på 21,4 sekunder med en bredde på 3,6 sekunder, ville opløsningen være

R = (21,4-16,8) /[0,5 * (3,4 + 3,6)] = 4,6 /3,5 = 1,3.