Mens han ikke udførte eksperimenter i moderne forstand, var han den første, der systematisk studerede forholdet mellem musikalske intervaller og længderne af vibrerende strenge. Denne opdagelse lagde grundlaget for den videnskabelige undersøgelse af lyd og dens egenskaber.
Det er vigtigt at bemærke, at andre gamle civilisationer, ligesom egypterne og babylonierne, også havde kendskab til lyd og dens egenskaber, men Pythagoras arbejde markerede et betydeligt skridt fremad i den videnskabelige forståelse af akustik.