En atommasseenhed er defineret i forhold til massen af et kulstof-12-atom, som tildeles en nøjagtig værdi på 12 amu. Det betyder, at 1 amu er lig med 1/12 af massen af et kulstof-12 atom.
Det faktiske antal atomer i 1 amu afhænger af det specifikke element eller isotop, der overvejes. For eksempel, hvis vi tager selve carbon-12, indeholder et mol carbon-12 (12 gram) 6,02214076 x 10^23 atomer. Da 12 gram kulstof-12 svarer til 12 amu, kan vi beregne antallet af atomer i 1 amu ved at dividere Avogadros tal med 12:
Antal atomer i 1 amu (carbon-12) =(6,02214076 x 10^23 atomer) / 12 amu
≈ 5,02 x 10^22 atomer/amu
Denne beregning viser, at der er cirka 5,02 x 10^22 atomer i 1 amu for carbon-12. Det er dog vigtigt at bemærke, at denne værdi vil afvige for andre grundstoffer og isotoper på grund af variationer i deres atommasse.