Nanopartikler forenkler DNA -identifikation og kvantificering

I en artikel offentliggjort i Lille , forskere har med succes anvendt en ny kvalitativ og kvantitativ metode til påvisning af en DNA -sekvens karakteristisk for Leishmania infantum kinetoplast, en hyppig parasit hos dyrlæger, der også påvirker mennesker.

At overvinde den klassiske PCR -teknik

Polymerase Chain Reaction (PCR) er dagens standardmetode til at identificere tilstedeværelsen af ​​en specifik DNA -sekvens i en prøve. PCR bruger enzymer og to primere, tråde af korte nukleinsyresekvenser, der fungerer som udgangspunkt for DNA -kopiering. Når detektionen er positiv, denne teknik producerer millioner af kopier af problemsekvensen for at lette dens påvisning. Denne DNA -amplifikation involverer præcise termiske ændringer (termocykling) og sofistikeret og dyrt udstyr, som overvintes af en alternativ tilgang kaldet isotermisk amplifikation, udføres ved konstant temperatur.

Artikelforfatterne præsenterer et nyt design af isotermisk amplifikation ved hjælp af primere mærket med både guldnanopartikler og magnetiske mikroperler. Det forstærkede produkt bærer begge etiketter, der muliggør en hurtig oprensning og kvantificering. De første primers magnetiske egenskaber letter oprensning/forkoncentration af det amplificerede DNA ved hjælp af magnetiske separationsmetoder. På den anden side, guldnanopartiklerne kvantificeres let ved simple elektrokatalytiske detektionsmetoder. Dermed, brugen af ​​primere mærket med guldnanopartikler og magnetiske mikroperler gør isotermisk amplifikation til en hurtigere og lettere kvalitativ og kvantitativ diagnostisk metode.

Nanopartikler til påvisning af Leishmania og andre point-of-care tests

Denne fremgangsmåde blev med succes anvendt til påvisning af en DNA -sekvens karakteristisk for Leishmania infantum kinetoplast, en parasit, der er ansvarlig for en sygdom hos hunde, vilde canids og mennesker. Den elektrokemiske metode udviste en god reproducerbarhed og følsomhed. Desuden, amplificeret DNA fra hunde uden Leishmania blev fuldstændig diskrimineret, demonstrere specificiteten af ​​både amplifikationsproceduren og den elektrokemiske detektion. Faktisk, udførelsen af ​​den foreslåede tilgang er bedre end opnået med andre point-of-care tests til Leishmania-detektion, tilbyder også et kvantitativt værktøj til bestemmelse af parasitter. Denne metode repræsenterer en universel metode, der kan anvendes til ethvert isotermisk DNA -amplifikationsdesign.