Gel Electrophoresis Lab Procedures

Gelelektroforese er en metode, der anvendes i laboratorier til måling og sortering af tråde af DNA. Det er nødvendigt, fordi DNA under normale forhold er for lille til at manipulere, selv når det ses ved brug af de fleste mikroskoper. Gelelektroforese er en forholdsvis enkel procedure, og den samme grundlæggende teknik kan også bruges til at adskille individuelle proteiner.

Gelmatrixen

For at starte gelelektroforese skal du først oprette gelen . Gels fremstilles typisk i tynde ark ved anvendelse af et stof kaldet agarose. Pulveriseret agarose placeres i en kolbe efterfulgt af en saltvandsløsning kaldet en buffer. Denne blanding af agarose og buffer opvarmes, indtil de to stoffer smelter sammen og hældes derefter i en formningsform. En anordning kaldet en kam placeres derefter i den ene ende af støbeformen, før gelen afkøles. Når gelen afkøles, fjernes kammen og efterlader små slidser, som vil blive brugt til at holde DNA-prøver.

Et særligt kendetegn ved den afkølede agaroseblanding (kaldet en gelmatrix) stammer fra, at det er skabt med saltvand. Når den elektrificeres, bliver matrixen ledende, så el strømmer langs dens længde. En anden speciel egenskab af gelmatrixen er tilstedeværelsen af ​​regelmæssige mikroskopiske huller. Disse huller vil gøre det muligt for tråde af DNA at rejse gennem gelmatrixen og lette sorteringsprocessen.

Electrophoresis Chamber

Dit næste skridt er at skabe et elektroforesekammer. Dette er en lille rektangulær boks, der er forbundet med en positiv og negativ elektrisk forbindelse i begge ender. Kammer er typisk lavt, lille nok til at passe på en bordplade og er bygget af klare materialer som plexiglas.

Saltvandsløsningen hældes i bunden af ​​elektroforesekammeret, og gelmatrixen er nedsænket lidt i denne opløsning . Saltvandet tjener to formål: hjælper strømmen af ​​strøm og holder gelmatrixen fugtig. Da DNA drives med en negativ ladning, placeres din matrix, så dine prøver vil blive placeret ud for din negative elektriske forbindelse.

Forberedelse af DNA

DNA-prøver fremstilles derefter. Da DNA i opløsning er alt andet end umuligt at se, tilsættes et farvestof, der kaldes en påfyldningsbuffer, til hver enkelt prøve. Denne agent fortykker også DNA-opløsningen, hvilket gør den mindre løbende og mere anvendelig. Brug en pipette til at overføre en prøve af DNA-opløsning til hver vekslende slids i gelmatrixen. I den tomme spalte mellem hver prøve skal du placere en opløsning af DNA, hvis længde du allerede kender (kaldet DNA-standard) til forsøgskontrol og sammenligning.

Tænd for strømmen

Nu tænder din elektroforese kammer. Under negativ effekt bliver dine DNA-prøver tvunget over kammerets længde. Små tråde af DNA vil bevæge sig hurtigere gennem gelmatrixen, og i løbet af kort tid vil de adskille sig fra længere, langsommere tråde. Farven i farvestoffet giver dig mulighed for at følge sporet af DNA'et. Du kan ikke se individuelle tråde af DNA, men tråde af samme længde vil klumpe sammen.

Endelige trin

Når DNA'et er sorteret, fjernes matrixen fra elektroforeseen kammer. Derefter farves DNA'et for at muliggøre lettere måling og undersøgelse.