Biochemistry Blotting Techniques

Biokemi studier molekyler som DNA, RNA og proteiner. Blottingsteknikker er, hvad forskere bruger til at adskille disse typer af molekyler. I celler eksisterer de som en blanding. Blotting giver forskere mulighed for at finde et protein blandt mange, som en nål i en høstak. Blotting udføres generelt ved at lade en blanding af DNA, RNA eller protein strømme gennem en gelplade. Denne gel giver små molekyler mulighed for at bevæge sig hurtigere end større. De separerede molekyler presses derefter mod en membran, som hjælper med at flytte molekylerne fra gelen på membranen. Molekylerne holder fast i membranen, men forbliver på samme sted, bortset fra hinanden, som om de stadig var i gelen.

Western Blot

Western blotting er en almindelig teknik til adskillelse proteiner efter størrelse, men i lige kolonner. Disse parallelle kolonner tillader forskere at sammenligne mængden af ​​et protein på tværs af forskellige prøver, der køres lige ved siden af ​​hinanden, som bowlingbaner. Hvis du for eksempel testede virkningen af ​​forskellige mængder af et lægemiddel på cellevækst, ville du behandle fire forskellige grupper af celler med en anden mængde medicin. Derefter kunne du bryde cellerne åbne og køre proteinerne fra hver gruppe i separate baner på en gel. Spredning af proteinerne på denne måde giver dig mulighed for at se, hvad en stigende koncentration af lægemidler gør for et bestemt protein.

Northern Blot

Northern blotting bruges til at detektere RNA. Celler kan brydes åbne for at frigive deres RNA. RNA'et fra forskellige celletyper kan køres på separate baner på en gel. Gelen spreder de forskellige RNA efter størrelse. Disse pæne, parallelle rækker af RNA tillader en forsker at sammenligne, hvilken celletype der har hvor meget som RNA. Denne metode gør det muligt for en forsker at bestemme, om celler fra en bestemt sygdom har mere af dette RNA eller mindre af det RNA. Northern blotting kan afsløre, hvordan en sygdom virker på niveau med RNA produktion.

Southern Blot

Southern blotting er den oprindelige blotting teknik, som startede navngivningssystemet. Det blev opfundet af Edwin Southern. Southern blot bruges til at detektere mængden af ​​DNA i en blanding. Ligesom med protein og RNA, kan en celle DNA frigives, når cellen er åben. Southern blotting adskiller DNA fra forskellige celletyper efter størrelse. DNA fra hver prøve spredes i pæne, parallelle baner. Individuelle stykker af DNA kan detekteres ved hjælp af en radioaktiv eller fluorescerende probe, som er designet til kun at binde til det stykke DNA. Energisignalet fra en radioaktiv probe eller lysets blink fra et fluorescerende signal fortæller forskerne, hvor meget af det pågældende stykke DNA er i hver prøve.

Andre blots

De tre største blotting teknikker - vestlige, nordlige og sydlige - er blevet ændret på forskellige måder til at opdage lidt forskellige molekyler. Hver modificeret teknik er generelt gjort den sædvanlige måde, men bruger en anden metode til at detektere det molekyle, der spredes ud i parallelle baner. Southwestern blots detekterer molekyler af protein fast til DNA. Northwestern blots detekterer molekyler af protein fast til RNA. Farvestrådsblottene opdager molekyler af protein, der sidder fast i andre proteiner.