Proteasehæmmere Cocktail

Proteasehæmmere er enzymer, der hæmmer proteasernes virkninger, som er visse enzymer, der dræber proteiner i cellerne. Der er flere proteaser, der målretter mod forskellige proteiner. For at bevare funktionaliteten af ​​proteiner efter cellelysen anvendes en kombination eller en cocktail af proteasehæmmere. Disse er tilgængelige i opløsning, tablet eller pulverform.

Proteasehæmmere

Lav aprotinin, leupeptin og pepstatin ved lagerkoncentrationer på 100uM (MicroMolar).

Aprotinin er tilgængelig i opløsningsform ved en bestandskoncentration på 100 mM. For at gøre 1 ml (milliliter) på 100uM, opløs 1ul (mikroliter) i 999ul af 1X PBS (Physiological Buffer Solution).

Leupeptin er tilgængeligt som et pulver. Molekylvægten af ​​leupeptin er 475,6. Løs 100 μg pulver i 2 ml vand for at gøre bestandskoncentrationen på 100 μM.

For at lave Pepstatin opløses 100 μg pepstatinpulver i 1,45 ml vand for at gøre en bestandskoncentration på 100 μM.

Alle disse kan enten blandes eller opbevares individuelt på minus 80 grader Celsius.

Lav PMSF (Phenylmethylsulfonylfluorid) på lager 100mM. PMSF kommer i pulverformen. Molekylvægten af ​​PMSF er 174,19. Opløs 10 mg PMSF i 572 μl 100% ethanol og opbevar ved 4 grader Celsius. Det er lysfølsomt og skal opbevares i mørke.

Dette tilsættes lysisbufferen lige før brug.

Bland proteaserne sammen i de krævede koncentrationer. Generelt er de fortyndet med en faktor på 100 til brug.

Tip

Tilgængelige cocktails af proteasehæmmere sparer tid og er nemme at bruge. De kommer i form af tabletter eller opløsninger.