Sådan beregnes cellekoncentration

Forskere og teknikere har ofte brug for at beregne koncentrationen af celler i en suspension. Når en patient for eksempel får sit blod trukket på et lægekontor, kan laboratoriet bruge visse metoder til at se efter mængden af hvide blodlegemer i et givet blodvolumen. Dette giver lægen en masse information om helbredet omkring hendes patient, især hans immunsystem, og om han kæmper mod en infektion eller en anden sygdom. Tests som dette kan se efter mange andre celler i blod såvel som rygmarvsvæske og andre kropslige væsker, såsom sædcelleoptællinger i sæd til fertilitetsformål. Forskere beregner også cellekoncentrationer af bakterier, gær og andre mikroorganismer til adskillige formål, lige fra økologisk forskning til industrielle teknologier. En af de mest almindelige teknikker undervises også i mange universitetsbiologiske klasser, og den bruger en enhed kaldet et tællekammer.

1. Fortynding af prøven
   
   

   Før cellesuspensionen kan gå ind i tællekammeret, kan det være nødvendigt at fortynde det, fordi det kan indeholde tusinder eller millioner af celler. I dette tilfælde kan cellerne ikke med rimelighed tælles. For at fortynde prøven skal du bruge en steril pipette til at placere ti mikroliter af celleopløsningen i et reagensglas indeholdende 90 mikroliter fortyndingsmiddel. Type fortyndingsmiddel afhænger af celletypen. Bland det godt. Denne opløsning er nu ti gange mere fortyndet end den oprindelige prøve, så dens fortyndingsfaktor er 10 <-1. Mærk det. Gentag dette flere gange med en steril pipette hver gang, indtil opløsningen er fortyndet nok. Hvis du fortyndede det en anden gang, var det andet reagensglas 100 gange mere fortyndet end den oprindelige opløsning, så fortyndingsfaktoren var 10 -2 og så videre.
   

2. Tæller cellerne
   

   Det kan være nødvendigt at prøve flere fortyndinger for at bestemme den rigtige fortyndingsfaktor til tællekammeret. Et tællekammer er dybest set en meget lille, klar, rektangulær kasse med en nøjagtig dybde og et præcist gitter indskrevet over toppen. Det er også kendt som et hæmocytometer eller nogle gange et hæmacytometer. Målet er, at suspensionen skal være fortyndet til, at når den ses i tællekammeret, overlapper ingen celler, og de fordeles over gitteret på en ensartet måde. Pipetter den fortyndede suspension, der indeholder cellerne, ind i brønden i tællekammeret, hvor den vil sætte sig ned i gitterkammeret gennem kapillærvirkning. Placer tællekammeret på mikroskoptrinnet og se det under lav effekt.
   

   Gitteret indeholder firkanter, der er lavet af endnu mindre firkanter. Vælg cirka fire eller fem firkanter, eller hvor mange du skal tælle mindst 100 celler i et mønster, du vælger, f.eks. De fire hjørner og et midterste firkant. Hvis cellerne er store, kan det være de store firkanter, men hvis cellerne er små, kan du i stedet vælge de mindre firkanter.
   

3. Beregning af koncentration
   
   

   Den specifikke lydstyrke for hver gitterkvadrat kan variere ved at tælle kammerfabrikanten, men ofte er kammerets dybde 0,1 millimeter, arealet af de store firkanter er 1 kvadrat millimeter, og området for de mindre firkanter er 0,04 kvadrat millimeter. De større firkanter har derefter et volumen på 0,1 kuber millimeter. For dette eksempel antager du, at du tællede i alt 103 celler i fem firkanter, og at du fortyndede den indledende prøve, indtil fortyndingsfaktoren var 10 ^-2.
   

   Hvis hvert gitterfelt har et volumen på 0,1 kubik millimeter og fem blev talt, derefter var det totale volumen af det kammer, der blev talt, 0,5 kubik millimeter, og der var 103 celler. Fordoblet for at gøre det til 1 kubik millimeter ville det gøre det til 206 celler. En kubikcentimeter svarer til 1 ml, hvilket er en nyttig måling for væsker. Der er 1.000 kubikmeter i en kubikcentimeter. Hvis der havde været en kubikcentimeter eller en milliliter suspension, ville du derfor have talt 206.000 celler (206 x 1.000). Sådan ser det ud som en ligning:
   

   Mængde af gitterkvadrat × antal tællede kvadrater \u003d samlet volumen af talt suspension
   

   Antal celler ÷ volumen talt suspension \u003d celletælling pr. Millimeter cubed
   

   Cell count per millimeter cubed × 1000 \u003d cell count per milliliter
   

4. Beregning af ufortyndet koncentration
   
   

   Du skal redegøre for eventuel fortynding udført for at foretage den indledende opløsning, der kan tælles under mikroskopet. I dette eksempel er fortyndingsfaktoren 10 -2. Sådan beregnes den oprindelige koncentration af opløsningen:
   

   Celleantallet pr. Milliliter ÷ fortyndingsfaktor \u003d Cellekoncentration
   

   For dette eksempel er celletallet pr. Milliliter 206.000, og det divideres med 10 ^{-2 (0.01) giver en cellekoncentration på 20.600.000 celler pr. Ml i den indledende prøve.}