Hvordan beregner du koncentrationen af ​​xanthophyll på ethanol?

forståelse af processen

* ekstraktion: Xanthophyll ekstraheres fra et kildemateriale (f.eks. Planteblade) ved hjælp af ethanol.

* spektrofotometri: Koncentrationen af ​​xanthophyll i ethanolopløsningen bestemmes ved anvendelse af et spektrofotometer. Xanthophyll absorberer lys ved specifikke bølgelængder, og mængden af ​​absorberet lys er proportional med dens koncentration.

Metoder

Her er to almindelige metoder til beregning af xanthophyllkoncentration:

1. Brug af en standardkurve

* Forbered en standardløsning: Få en ren xanthophyll -standard. Opløs en kendt vægt af standarden i ethanol for at skabe en stamopløsning af kendt koncentration.

* Opret en standardkurve: Fortynd stamopløsningen til at skabe en række opløsninger med kendte koncentrationer (f.eks. 10, 20, 30, 40, 50 ug/ml).

* Mål absorbans: Brug et spektrofotometer til at måle absorbansen af ​​hver standardopløsning ved den maksimale absorbansbølgelængde for xanthophyll (typisk omkring 440-450 nm).

* Plot standardkurven: Plot absorbansværdierne på Y-aksen og de tilsvarende koncentrationer på X-aksen. Dette vil skabe et lineært forhold mellem absorbans og koncentration.

* Mål ukendt prøve: Kør din ekstraherede Xanthophyll -prøve gennem spektrofotometeret ved den samme bølgelængde. Find den tilsvarende koncentration på din standardkurve baseret på den målte absorbans.

2. Brug af øl-Lambert-lov

* Beer-Lambert Law: Denne lov siger, at absorbans (a) er direkte proportional med koncentrationen (c) af analytten og stien længde (l) af lysstrålen gennem opløsningen. Ligningen er:A =εcl, hvor ε er den molære absorptivitet (en konstant specifik for analytten).

* Bestem molabsorptivitet (ε): Denne værdi findes typisk i litteratur eller kan eksperimentelt bestemmes ved hjælp af en standardløsning.

* Mål absorbans: Mål absorbansen af ​​din ekstraherede xanthophyll -prøve ved den maksimale absorbansbølgelængde.

* Beregn koncentration: Omarranger øl-Lambert Law-ligningen for at løse for koncentration:C =A / (εl).

Overvejelser:

* Ekstraktionseffektivitet: Sørg for, at ekstraktionsprocessen er effektiv, og at al Xanthophyll er blevet ekstraheret fra kildematerialet.

* opløsningsmiddelrenhed: Brug ethanol af høj kvalitet for at undgå interferens fra urenheder.

* Kalibrering: Kalibrer altid dit spektrofotometer inden målinger for at sikre nøjagtige resultater.

* Valg af bølgelængde: Vælg den rigtige bølgelængde for maksimal absorbans af xanthophyll (normalt omkring 440-450 nm).

* interfererende forbindelser: Vær opmærksom på, at andre pigmenter i din prøve kan absorbere ved lignende bølgelængder. Brug om nødvendigt en metode til at adskille xanthophyll fra disse forstyrrende forbindelser.

Eksempel Beregning:

Lad os antage, at du har et xanthophyll -ekstrakt i ethanol med en absorbans på 0,500 ved 450 nm. Den molære absorptivitet (ε) af xanthophyll ved 450 nm er 25.000 m⁻¹cm⁻¹ og stien længde (L) for din cuvette er 1 cm.

Brug af øl-Lambert-loven:

C =a / (εl)

C =0,500 / (25.000 m⁻¹cm⁻¹ × 1 cm)

C =2,0 × 10⁻⁵ m (eller 20 um)

Vigtig note: Dette er et forenklet eksempel. Den specifikke metode og beregninger afhænger af de specifikke omstændigheder og det udstyr, du bruger. Konsulter altid relevant litteratur og protokoller for nøjagtige resultater.