Sådan beregnes mængden af ​​bakterier Present

Forskere bruger serielle fortyndinger (en række 1:10 fortyndinger) til at beregne befolkningstætheden af ​​bakteriekulturer. Når en dråbe kultur indeholdende et lille antal bakterier er plettet og inkuberet, vil hver celle teoretisk nok være langt nok væk fra andre celler, at den vil danne sin egen koloni. (I virkeligheden kan nogle kolonier være efterkommere af to nærliggende celler, men det er sjældent i fortyndede kulturer, og antallet af kolonier er således et meget godt skøn over antallet af celler, der oprindeligt blev overført til pladen.) Fordi befolkningstætheden er ukendt, en række fortyndinger skal bruges for at ende med en plade med et passende antal kolonier.

Seriefortyndinger

Mærk de seks reagensglas (hver indeholder 9 ml vækst medier) som 1 til 6. Mærk de seks agarplader som 1 til 6. Brug en pipetter og sterile 1 ml pipetter til at overføre 1 ml bakteriekultur til rør 1.

Bland godt og overfør 1 ml fra rør 1 ind i rør 2 ved hjælp af en pipetter og sterile 1 ml tip.

Gentag trin 2 for de resterende rør, hver gang overførsel af 1 ml fra det senest anvendte rør til det næste rør.

Brug en pipetter og sterile 0,1 ml tip til at overføre 0,1 ml fra rør 1 til en agarplade. Flamme en L-formet glasstang og brug den til at sprede dråben jævnt rundt om pladen. Inkuber pladen i 48 timer ved en passende temperatur for de anvendte bakterier. Forskellige typer af bakterier har forskellige optimale væksttemperaturer. Hvis du ikke kan finde den optimale væksttemperatur ved hjælp af referencemateriale, skal du prøve at inkubere pladerne ved 25 og 37 grader.

Gentag trin 4, hver gang overførsel af væske fra et andet reagensglas til den tilsvarende plade.
< h2> Befolkningsberegninger

Overhold de seks plader og vælg den med 30 til 200 isolerede kolonier.

Multiplicer antallet af kolonier på pladen med 10 for at beregne antallet af celler pr. ml kultur fra det anvendte fortyndingsrør.

Multiplicer tallet fra trin 2 med 10 ^ (tallerkenummer) for at beregne antallet af celler pr. ml original kultur. Værdien af ​​10 ^ (tallerkenummer) er fortyndingsfaktoren for den kultur, der anvendes til at inokulere denne plade.

Tip

Inkluder alle nødvendige næringsstoffer i agarpladerne. Auxotroffe bakterier kræver visse aminosyrer ud over de grundlæggende medieingredienser. Forskellige auxotrofer har forskellige næringsbehov. Konsulter referencemateriale for at finde ud af hvilke aminosyrer, hvis nogen, dine bakterier har brug for.

Vent et sekund mellem at flamme glasstangen og bruge den, for ikke at forbrænde bakterierne.

Advarsel

Brug altid laboratoriehandsker, når du håndterer bakterier.