Isolationsteknikker til en Streak Plate

Selv om de ikke kan ses med det blotte øje, er bakterier overalt. De findes i mad, jord, vand, overflader i vores hjem og i og på vores kroppe. Bakterier findes generelt i blandede populationer. Isolering af en specifik bakterie fra andre bakteriearter i en given prøve giver mikrobiologer mulighed for at studere sin struktur og funktion, egenskaber anvendt ved identifikationen. Mikrobiologer isolerer ofte bakterier ved hjælp af en af ​​flere stregplade teknikker.

Værktøjer

En inokuleringssløjfe bruges til at overføre mikroorganismer. Den består af en nichrom- eller platinatråd med en lille, cirkulær sløjfe i den ene ende. Den anden ende er lige og glider ind i et håndtag. Plastik engangs inokulerende sløjfer er også tilgængelige. Bakterier kan kun isoleres, hvis de vokser. Mikrobiologer dyrker bakterier til isolering af stribeplader i overfladiske, runde petriskåle fyldt med et fast medium, kaldet agar. Agar efterligner det miljø, hvor bakterierne naturligt vokser. De mediefyldte retter er sterile og lidded for at forhindre vækst af uønskede organismer. Under isolering af strejkeplader steriliseres inokuleringssløjfen gentagne gange i en Bunsen-brænders flamme.

Princip

Stribeteknikken er den mest populære metode til isolering af specifikke bakterier fra en prøve, der indeholder en blanding af mikroorganismer. Teknikken fortynder i alt væsentligt antallet af organismer og reducerer deres tæthed. Det giver mikrobiologer mulighed for at skelne og isolere individuelle bakteriekolonier. En koloni er en synlig klynge af bakterier. Alle bakterier i en enkelt koloni stammer fra samme bakteriecelle. Følgelig er individuelle kolonier "rene" kolonier. Den rene koloni overføres til en anden plade for at producere en ren kultur bestående af en type bakterier.

Fremgangsmåde

Når det gøres ordentligt, strimler pladeisoleringen en prøve og gør det muligt for individuelle bakterieceller at udvikle sig til isolerede kolonier. En mikrobiolog begynder ved at sterilisere inokuleringssløjfen i en flamme. Hun afkøler sløjfen ved at røre den på agaret og dernæst slår søjlen ind i prøven og spreder den frem og tilbage for at dække en sektion af pladen. Hun steriliserer løkken, afkøler den og inokulerer en anden tilstødende del af pladen ved at trække sløjfen gennem det første afsnit flere gange og dække det andet afsnit ved hjælp af en zigzag bevægelse. Dette henter et lille antal bakterier fra den første sektion og overfører dem til den anden sektion. Antallet af gange denne grundlæggende procedure gentages afhænger af den anvendte strimmelplade metode. På trods af metoden bruges den oprindelige prøve kun til at inokulere den første sektion af pladen.

Metoder

Strikkeplademetoder varierer med antallet af agarsektioner, der er strikket. T-streakmetoden bruger tre sektioner: den øvre halvdel og to lige store bundafsnit. Det oprindelige inokulum placeres i den øverste halvdel af pladen. Bakterier trækkes fra topsektionen til en af ​​bundafsnittene, og derefter fra den nederste sektion til den anden. I kvadrantmetoden er fire lige store sektioner stribet. Den kontinuerlige strimmelmetode indebærer typisk at inokulere den øverste halvdel af pladen, dreje den 180 grader og inokulere den anden halvdel af pladen uden at sterilisere sløjfen eller trække bakterier fra det foregående afsnit.