Hvad er TA Cloning?

TA-kloning er en enkel og bekvem metode til subkloning af polymerasekædereaktion (PCR) -produkter. "TA" er kort for "thymin" og "adenin". Denne kloningsteknik udnytter thymins evne til at hybridisere til adenin i nærværelse af ligaser. Restriktionsenzymer anvendes ikke i modsætning til den traditionelle subkloningsmetode. I stedet amplificeres PCR-produkter ved hjælp af Taq-polymerase-enzymer.

Metode

TA-kloningsmetoden anvender terminale transferaseaktiviteten af ​​visse deoxyribonukleinsyreoverhæng i hver ende af PCR-produktet.

En lineariseret kloningsvektor med en enkelt, tre prime-T (3'-T) overhæng kaldet en T-vektor anvendes til at klone dette PCR-produkt i en plasmidvektor. PCR-produktet blandes med denne vektor i høj andel.

DNA ligase (T4 ligase) tilsættes til blandingen, hvilket gør det muligt for de to produkter at hybridisere og slutte sig.

Fordele og ulemper < TA-kloning er en bekvem metode til subkloning af PCR-produkter i den lineariserede vektor, og den er meget enklere og hurtigere end traditionelle subkloningsmetoder. Fordi denne metode ikke bruger restriktionsenzymer, kan produkter uden restriktionsenzymsteder klones.

En ulempe er, at TA-kloningssæt er meget dyre, og derfor er deres anvendelse begrænset. Desuden er der ingen retningsbestemt kloning; så er sandsynligheden for kloning i en modsat retning større.

TA Kloningskits

Flere producenter sælger TA kloningskits. Nogle er Invitrogen, QIAGEN og Premier Biosoft.