Videnskab
 science >> Videnskab >  >> Kemi

Hvordan man identificerer Enterobacter Aerogenes API 20E

Enterobacter aerogenes og andre species af Enterobacteriaceae er lette at identificere ved hjælp af API-20E test kit. Dette kit, fremstillet af bioMeriuex Inc., omfatter 20 mini-rør eller brønde til testen. Prøven består i at inokulere en ren bakteriesuspension i testbrøndene og læse de farvereaktioner, der forekommer. Identifikation er baseret på at konvertere resultaterne af disse farve reaktioner til en syv-cifret kode kendt som Analytisk Profilindeks. Matchning af denne kode med producentens database giver en identifikation af organismen.

Isolér organismen du ønsker at identificere på et kulturmedium, der er specifikt for Enterobacteriaceae. Brug API 20E test kit kun med rene kulturer og ikke direkte på blandede kulturprøver.

Åbn en ampulle indeholdende 5 ml natriumchlorid 0,85 procent medium. Fjern en enkelt koloni fra en 18 til 24 timer gammel isoleringsplade med en pipette og tilsæt den i ampullen. Bland for at opnå en homogen suspension. Brug denne suspension, så snart du er færdig med at forberede den.

Opsæt en inkubationsboks, der består af honeycombed brønde i en bakke forsynet med låg. Åbn kassen, og tilsæt 5 ml demineraliseret eller destilleret vand i bakkebrøndene. Pak den strimmel, der leveres i API 20E-testkitet, og læg det i inkubationsboks.

Fyld rør og kugle af brøndene mærket "GEL," "VP" og "CIT" med suspensionen du har forberedt I de resterende brønde skal du fylde bakteriesuspensionen i røret, men ikke kuppen. Tilsæt mineralolie i brøndene mærket "ADH", "ODC", "LDC", "URE" og "H2S" for at skabe et anaerobt miljø.

Dæk inkubationsboks med låg og inkubér ved en temperatur mellem 34 og 38 grader Celsius i 18 til 24 timer.

Overhold brøndene, og bemærk reaktionerne på resultatarket. Forudsat at mindst tre tests er positive, fortsæt til farve reaktionerne ved hjælp af kemiske testopløsninger eller reagenser, der fulgte med sættet. Tilsæt en dråbe TDA reagens i brøndet mærket "TDA" og en dråbe hver af VP1 og VP2 reagenser til godt mærket "VP". Hvis færre end tre tests kom ud positivt, inkubere båndene i yderligere 24 timer, før de tilsættes disse reagenser.

Overhold farveændringerne i brøndene. En rødbrun farve i TDA indikerer en positiv reaktion. Vent i 10 minutter efter at reagenserne fra sættet er tilføjet til VP1 og VP2. Overvej en rød eller lyserød farve som positiv og en lyseblå farve, der vises efter 10 minutter som negativ.

Tilføj en enkelt dråbe JAMES reagens fra testkit til brøndet mærket "IND". Overvej en lyserød farve i hele kuglen som en positiv reaktion.

Udfør oxidasetesten som specificeret af kitproducenten, og optag resultaterne sammen med resultaterne fra de tidligere 20 tests.

Brug aflæsningstabellen, der leveres med testkit til at tildele værdier for de reaktioner, der observeres i hver af testbrøndene. Tilføj disse værdier som foreskrevet for at opnå det syvcifrede profilnummer.

Indfør dette syvcifrede profilnummer i kitfabrikantens database via en berøringstonetelefon. Vent til at modtage den identifikation, der leveres af databasen. Hvis profilnummeret ikke giver specifikke resultater, skal du udføre de supplerende tests, der er angivet af kitproducenten.

Klik for at udvide hele teksten