Sådan beregnes beregningerne for spektrofotometre

Et spektrofotometer anvendes til at bestemme koncentrationen af ​​visse forbindelser, såsom protein, i en opløsning. Generelt lyser et lys gennem en kuvette fyldt med en prøve. Den mængde lys, der absorberes af prøven, måles. Da forbindelser absorberer lys i forskellige spektrale områder, skal den rigtige bølgelængde indstilles til analysen. Der er mange måder at beregne koncentrationen af ​​ukendte prøver gennem spektrofotometri, men ved brug af referencestandarder giver den bedste nøjagtighed. Endvidere angiver standarder også, om spektrofotometeret er forkert eller andre problemer med analysen.

Beregning gennem lige linjens ligninger

Analyser referencestandarder i begyndelsen af ​​analysen. Standarder er kendte koncentrationer og bruges til at kalibrere udstyr og kontrollere nøjagtigheden. Alle prøver skal falde inden for standardernes arbejdsområde. Hvis ikke, skal prøverne fortyndes eller koncentrationen af ​​standarder øges.

Lav et scatterdiagram eller linjediagram med standardkoncentration og absorptionsmålinger. Koncentrationen vil være på y-aksen, absorptionsevnen på x-aksen. For eksempel er standarderne 1 ppm, 2,5 ppm og 5 ppm. Den givne absorptionsevne var 1 ppm = .25, 2,5 ppm = .5 og 5 ppm = .75.

Formuler trendlinjen for at vise en ligning på grafen. Ligningen vil vise formlen y = mx + b. For eksempel ved anvendelse af standarderne i trin 2 er ligningen y = .1224x + 0,1531. De fleste trendlinier er opsnappet til nul, men det afhænger af analysemetoden og R-kvadreret værdi.

Analyser ukendte prøver og optag absorptionslæsninger.

Brug ligningen (y = mx + b ) for at bestemme koncentrationen af ​​prøver.

Forstå lige linjens ligning

Lad "Y" svare koncentrationen. Dette er, hvad der vil blive løst for.

Lad "X" svare til absorptionen af ​​prøven. Dette er absorptionsmåling målt af spektrofotometeret.

Tillad at "" svarer til hældningen og "b" for at svare til y-afsnit. Begge er givet, men hvis trendlinjen blev tvunget gennem 0, vil "b" være 0.

Løs for koncentration. Brug eksemplet i trin 3 til at erstatte "x" som en given absorption af .563. Derfor:

y = .1224 (.563) + 0.1531

y (koncentration) = .222011

Tip

Koncentrationsenhederne vil være det samme som standarderne. For eksempel er enheder dele per million (ppm) eller dele pr. Milliard (ppb).

Referencestandarder og prøver er let forurenet.

Advarsel

Læs altid alle dele af analyse eller metode før udvikling.