Sådan beregnes længden af ​​DNA-fragmenter

Når det kommer til at måle længden af ​​DNA-fragmenter, som er meget mindre end celler, har mikrobiologer brug for et trick, og det mest hensigtsmæssige er gelelektroforese. Denne metode er baseret på det faktum, at DNA-fragmenter er opladet, og det er et alternativ til dyrere metoder, såsom røntgenkrystallografi, som var ansvarlig for opdagelsen af ​​DNA-dobbelt-helixstrukturen.

Hvordan gelelektroforese virker

Da DNA-molekyler oplades, påvirkes de af en elektrisk strøm. Når du sætter dem i en neutral gel og placerer en strøm over gelen, migrerer molekylerne mod den positive elektrode (anode). Fordi DNA molekyler af forskellige størrelser bærer samme ladning, færger de mindre hurtigere, så denne proces adskiller molekylerne i bånd, som kan sammenlignes med prøver af kendte størrelser.

En grundlæggende elektroforeseprocedure

Når gelen nedsænkes i en ledende opløsning og spænding påføres, begynder fragmenterne at migrere gennem gelen - de mindre første og de større, langsommere dem bagved. De danner sig til sidst i spektrumlignende bands efter størrelse.

Når dette sker, afbryder forskeren strømmen, infusionerer gelen med et DVA-bindende farvestof og undersøger prøverne under ultraviolet lys. Ved hjælp af stigen som reference kan forskeren bestemme størrelsen på hver af fragmenterne i et synligt band. Kun bånd er synlige - enkelte DNA-fragmenter er for små til at se.

Bestemmelse af længder af ukendte fragmenter

Chancerne er ikke alle bånd i en prøvepar op med et band på stigen, så at bestemme størrelserne af disse ukendte fragmenter, videnskabsfolk plot normalt en graf. På x-aksen er afstanden af ​​hvert bånd i stigen i millimeter, mens y-aksen er størrelsen af ​​hvert bånd. Når punkterne er forbundet med en kurve, kan størrelsen af ​​et hvilket som helst bånd ekstrapoleres fra kurven efter måling af den afstand, der er rejst af båndet i millimeter.