Hvordan isolerer jeg bakterier fra jord?

Isolering af bakterier fra jord er et vigtigt første skridt i mange mikrobiologiske eksperimenter. Når de er isoleret, kan bakterier analyseres yderligere for at bestemme ting, såsom deres arter og deres funktion i jordmiljøet. Selv en lille mængde jord kan indeholde millioner af bakterier, hvilket gør det nødvendigt at fortynde en jordprøve, før bakterier isoleres fra prøven.

Mål 100 ml. destilleret vand i den graduerede cylinder og føj det til den sterile flaske.


Vej 1 g jordprøve ud, og tilsæt den til flasken med destilleret vand. Luk flasken tæt, og ryst den for at blande opløsningen grundigt.


Mærk de sterile prøverør "10 ^ -3," "10 ^ -4," "10 ^ -5" og "10 ^ - 6." Tilsæt 9 ml destilleret vand til hvert af rørene ved hjælp af en af pipetterne.


Overfør 1 ml af opløsningen i flasken til røret mærket "10 ^ -3" ved hjælp af en ny pipette. Hæld røret og hvirvle det forsigtigt, indtil opløsningen er godt blandet.


Overfør 1 ml af opløsningen i prøverøret "10 ^ -3" til "10 ^ -4" -røret med en ny pipette. Låse røret "10 ^ -4" og hvirvle rundt til blanding. Gentag denne metode for at overføre opløsningen fra "10 ^ -4" røret til "10 ^ -5" røret og derefter fra "10 ^ -5" røret til "10 ^ -6" røret.


Placer tre prøver hver fra rørene "10 ^ -4," "10 ^ -5" og "10 ^ -6". Brug en ny pipette til at overføre 1 ml opløsning fra røret til en Petri-plade. Tilsæt ca. 15 ml næringsagar på pladen; læg derefter låget på pladen og hvurr forsigtigt, så agaren dækker bunden af pladen.


Lav en kontrolplade ved at sætte 1 ml destilleret vand i en Petri-plade ved hjælp af en ny pipette. Tilføj agar; sæt låget på og hvirvle pladen.


Lad Petri-pladerne stå lodrette, indtil agaren har sat sig. Inverter derefter pladerne og inkuber dem - enten i en inkubator eller ved stuetemperatur - i så lidt som 24 timer og op til fem dage.


Fjern pladerne fra inkubatoren efter den ønskede mængde inkubationstid. Tæl bakteriekolonierne på plader indeholdende ca. 30 til 300 kolonier. Brug en permanent markør til at markere de kolonier, du allerede har talt for at undgå at tælle de samme kolonier to gange.


Del antallet af kolonier, der er talt med fortynding - "10 ^ -4," "10 ^ -5 "eller" 10 ^ -6 "- af jordopløsningen for hver plade. Find antallet af dyrkbare bakterier i det oprindelige gram jord ved at beregne gennemsnittet af resultaterne fra hver tællende plade.




Tips


1. Følg aseptiske laboratorieteknikker gennem hele proceduren .
   
   
   
   
   

   Advarsler
   

2. For at forhindre kontaminering og mulig infektion fra bakterier skal du sørge for at bortskaffe alle Petri-plader, jord opløsninger og pipetter.
   

   Denne procedure måler kun dyrkbare bakterier. Ifølge Cornell University vil mellem 90 og 99 procent af jordbakterier ikke vokse på næringsagar.