Ud over antikodonsekvensen spiller den overordnede struktur af tRNA-molekylet også en rolle i at bestemme, om det kan binde til et mRNA. tRNA-molekylet skal kunne foldes til en specifik form, der gør det muligt for antikodonet at blive eksponeret og tilgængeligt for mRNA'et. Denne form bestemmes af interaktionerne mellem de forskellige baser i tRNA-molekylet, samt af interaktionerne mellem tRNA-molekylet og andre proteiner.
Endelig er bindingen af et tRNA-molekyle til et mRNA også påvirket af tilstedeværelsen af andre molekyler, såsom magnesiumioner og GTP. Disse molekyler er med til at stabilisere interaktionen mellem tRNA'et og mRNA'et, og de er også med til at sikre, at det korrekte tRNA-molekyle bindes til mRNA'et.