Hvorfor bruger du iskold tilstand i cellelysering?

1. Minimering af enzymaktivitet:

- Mange enzymer, især proteaser, er temperaturfølsomme, og deres aktivitet øges ved højere temperaturer. At holde lysebufferen og cellesuspensionen kold reducerer enzymaktiviteten markant og forhindrer nedbrydning af proteiner og nukleinsyrer. Dette er især vigtigt til isolering af intakte proteiner eller ekstraktion af RNA af høj kvalitet.

2. Bevarelse af cellulære komponenter:

- Cellemembraner er sammensat af lipider, der bliver mere flydende ved højere temperaturer. Denne fluiditet øger risikoen for membranbrud og lækage, hvilket fører til tab af cellulære komponenter som organeller og makromolekyler. Kolde forhold opretholder membranintegritet og forhindrer uønsket frigivelse.

3. Reduktion af nedbrydning af biomolekyler:

- Nukleaser (enzymer, der nedbryder nukleinsyrer) er også temperaturfølsomme. Kolde forhold hjælper med at minimere deres aktivitet, beskytte DNA og RNA mod nedbrydning under lysis.

4. Sænkning af cellulære processer:

- Metaboliske processer i celler fortsætter selv efter lysering. Ved at holde lysatet koldt, bremser du disse processer, minimerer yderligere nedbrydning af cellulære komponenter yderligere og sikrer en mere nøjagtig repræsentation af cellulær tilstand.

5. Letter proteinaggregering:

- I nogle tilfælde kan kolde temperaturer faktisk lette aggregeringen af ​​visse proteiner, hvilket kan være ønskeligt til nedstrøms anvendelser som proteinoprensning eller krystallisation.

Specifikke overvejelser:

- Den anvendte specifikke temperatur (f.eks. 0 ° C eller 4 ° C) afhænger af det særlige eksperiment og følsomheden af ​​målbiomolekylerne.

- Brug af proteaseinhibitorer i lysebufferen kan yderligere minimere proteinnedbrydning, selv ved varmere temperaturer.

Sammenfattende er det at bruge en iskold tilstand under cellelysering et afgørende trin for at opretholde integriteten af ​​cellulære komponenter, forhindre uønsket nedbrydning af biomolekyler og sikre en mere nøjagtig repræsentation af den cellulære tilstand.