Hvordan kan du isolere fri aminosyre fra protein?

Metoder til isolering af frie aminosyrer fra proteiner

1. Hydrolyse:

* Syrehydrolyse: Den mest almindelige metode. Stærke syrer (som HCI) bruges til at bryde peptidbindingerne i proteinet, hvilket frigiver de individuelle aminosyrer.

* Procedure:

* Proteinprøve behandles med koncentreret HCI (typisk 6M) ved høje temperaturer (100-110 ° C) i 12-24 timer.

* Denne proces spalter alle peptidbindinger og befriende frie aminosyrer.

* Efter hydrolyse fjernes syren ved fordampning, hvilket efterlader aminosyreblandingen.

* Fordele: Effektiv, relativt enkel.

* Ulemper: Kan føre til aminosyreforringelse, især tryptophan. Nogle aminosyrer som cystein kan blive ødelagt eller modificeret.

* Enzymatisk hydrolyse: Bruger specifikke enzymer (som proteaser) til at opdele proteiner i peptider og i sidste ende frie aminosyrer.

* Procedure:

* Specifikke enzymer vælges baseret på proteinets struktur og det ønskede resultat.

* Inkubation med enzymet ved optimale forhold muliggør kontrolleret sammenbrud.

* Fordele: Mildere forhold, mindre nedbrydning, kan være mere selektiv.

* Ulemper: Kan være dyrere, langsommere end syre hydrolyse.

2. adskillelse og oprensning:

* kromatografi:

* ion-udvekslingskromatografi: Adskiller aminosyrer baseret på deres ladning.

* Størrelseseksklusionskromatografi: Adskiller aminosyrer baseret på deres størrelse.

* High-performance væskekromatografi (HPLC): Meget følsom og præcis metode til adskillelse og kvantificering af aminosyrer.

* Elektroforese: Adskiller aminosyrer baseret på deres ladning og størrelse.

Overvejelser:

* Proteinkilde: Den type protein, du starter med, vil påvirke den bedste metode.

* Ønsket resultat: Ønsker du blot at identificere tilstedeværelsen af ​​frie aminosyrer, eller har du brug for at kvantificere dem?

* Følsomhed: Niveauet for følsomhed, der kræves i analysen.

* Omkostninger og udstyr: Overvej de tilgængelige ressourcer.

Generel arbejdsgang:

1. Proteinforberedelse: Isolere og rense proteinet af interesse.

2. Hydrolyse: Vælg den passende hydrolysemetode (syre eller enzymatisk).

3. adskillelse og oprensning: Vælg og optimer metoden til adskillelse og isolering af de frie aminosyrer.

4. Identifikation og kvantificering: Brug teknikker som kromatografi, elektroforese eller andre analysemetoder til at identificere og kvantificere de frie aminosyrer.

Vigtig note: De specifikke procedurer og betingelser for isolering af frie aminosyrer fra proteiner varierer afhængigt af proteinkilden, det ønskede resultat og de tilgængelige ressourcer.