Hvad er isoelektroforese?

isoelektrisk fokusering (IEF)

Du henviser sandsynligvis til isoelektrisk fokusering (IEF) , ikke "isoelektroforese". Mens begge udtryk involverer elektroforese, er de forskellige:

* Elektroforese er en generel teknik, der bruges til at adskille molekyler baseret på deres ladning og størrelse ved at påføre et elektrisk felt gennem en gel eller andet medium.

* isoelektrisk fokusering (IEF) er en specialiseret type elektroforese, der er specifikt designet til at adskille proteiner baseret på deres isoelektriske punkt (PI) .

Hvad er det isoelektriske punkt (PI)?

Det isoelektriske punkt (PI) af et protein er den pH, hvor proteinet bærer Ingen netto elektrisk ladning . Dette betyder, at de positive og negative ladninger på proteinet er afbalanceret. Ved pH -værdier under PI vil proteinet have en nettopositiv ladning og migrere mod katoden (negativ elektrode). Omvendt ved pH -værdier over PI vil proteinet have en netto negativ ladning og migrere mod anoden (positiv elektrode).

hvordan fungerer IEF?

IEF bruger en pH -gradient i gelen eller mediet. Proteinblandingen påføres gelen, og et elektrisk felt påføres. Proteiner vandrer gennem gelen, indtil de når pH, der svarer til deres PI. På dette tidspunkt bliver de neutrale og holder op med at migrere.

Dette resulterer i adskillelse af proteiner i forskellige bånd i henhold til deres PI, med proteiner med lavere PI'er, der migrerer længere mod anoden og proteinerne med højere PI'er, der vandrer videre mod katoden.

Anvendelser af IEF:

IEF er en kraftfuld teknik, der bruges i forskellige applikationer, herunder:

* Proteinanalyse :Identifikation og karakterisering af proteiner baseret på deres PI.

* Proteomics :Undersøgelse af proteinekspression og ændringer i proteinekspression under forskellige tilstande.

* biomedicinsk forskning :Analyse af proteinprofiler i biologiske prøver, såsom blod, urin og vævsekstrakter.

* Food Science :Identificering og kvantificering af proteiner i fødevarer.

* farmaceutiske midler :Analyse af proteinrenhed og stabilitet i lægemiddeludvikling.

Fordele ved IEF:

* høj opløsning :IEF tilbyder en høj grad af opløsning, hvilket muliggør adskillelse af proteiner med meget lignende PI'er.

* følsomhed :IEF kan detektere lave koncentrationer af proteiner.

* Reproducerbarhed :Teknikken er meget reproducerbar.

Ulemper ved IEF:

* begrænset prøvestørrelse :IEF kræver relativt små prøvevolumener.

* teknisk kompleksitet :IEF kræver specialudstyr og ekspertise til at udføre effektivt.

Sammenfattende er IEF en værdifuld teknik til at adskille og analysere proteiner baseret på deres PI, der tilbyder høj opløsning og følsomhed for forskellige anvendelser.