Hvordan bliver DNA'et i cellelysat synligt?

1. Cellelysering:

* Celler er brudt åbne og frigiver deres indhold, inklusive DNA.

* Dette kan gøres ved hjælp af forskellige metoder, såsom:

* vaskemidler: Forstyrr cellemembraner og frigør indholdet.

* enzymer: Nedbrydes proteiner, hvilket giver mulighed for frigivelse af DNA.

* Mekaniske metoder: Såsom sonikering eller perlebeholdning forstyrrer fysisk celler.

2. Fjernelse af cellulært affald:

* Efter cellelysering indeholder lysatet en blanding af cellulære komponenter.

* For at isolere DNA skal andre komponenter som proteiner og lipider fjernes. Dette kan opnås gennem:

* centrifugering: Spinning af lysatet ved høje hastigheder adskiller komponenter baseret på densitet. DNA er normalt i supernatanten.

* fordøjelse: Enzymer som proteinase K nedbryder proteiner.

* saltning: Tilsætning af salt til lysatet, der udfælder proteiner, men efterlader DNA i opløsning.

3. Udfældning af DNA:

* DNA'et udfældes derefter ud af opløsningen, hvilket gør det synligt. Dette gøres typisk ved hjælp af ethanol eller isopropanol .

* Disse alkoholer er mindre polære end vand, hvilket får DNA'et til at klumpe sammen og danne et synligt bundfald.

* Tilføjelsen af salt kan yderligere forbedre nedbør ved at neutralisere de negative ladninger på DNA -molekylet.

4. Visualisering:

* Det udfældede DNA opsamles derefter, typisk ved at spole det omkring en glasstang eller ved hjælp af en pipette.

* DNA'et vises som en hvid, streng masse Fordi det er meget opviklet og sammenflettet.

Vigtige punkter:

* Processen med DNA -isolering og visualisering kan optimeres baseret på celletypen og den tilsigtede anvendelse.

* Forskellige teknikker og reagenser kan bruges afhængigt af de specifikke eksperimentelle krav.

* visualisering kan også forbedres ved hjælp af farvningsteknikker, såsom at bruge et farvestof som ethidiumbromid, som binder til DNA og får det til at fluorescere under UV -lys.

Ved at forstå processen med DNA -nedbør og visualisering kan du effektivt isolere og analysere DNA fra forskellige kilder.