Hvilke enzymer bruger forskere til at binde et nyt genplasmid -DNA?

* begrænsningsenzymer: Disse enzymer fungerer som molekylære saks og skærer DNA ved specifikke sekvenser. De er afgørende for at skabe kompatible ender på plasmidet og genet af interesse.

* ligase: Dette enzym fungerer som molekylær lim, der forbinder de udskårne ender af plasmidet og genet sammen og danner et rekombinant plasmid.

Lad os nedbryde processen:

1. Begrænsning Digest: Plasmidet og genet af interesse skæres med det samme begrænsningsenzym. Dette skaber kompatible klistrede ender, som er korte, enkeltstrengede overhæng, der kan base-par med hinanden.

2. ligering: Det udskårne plasmid og gen blandes sammen med ligaseenzym. Ligasen slutter sig til de klistrede ender og danner et cirkulært plasmid indeholdende det nye gen.

Andre vigtige enzymer:

* DNA -polymerase: Dette enzym kan bruges til at udfylde huller i DNA'et, især hvis Restriktion -fordøjelsen skaber stumpe ender (uden klæbrige overhæng).

* alkalisk phosphatase: Dette enzym kan bruges til at forhindre selvforbindelse af plasmidet, hvilket kan ske, hvis plasmidet kun skæres med et begrænsningsenzym.

Kortfattet: Kombinationen af restriktionsenzymer og ligase er de vigtigste spillere til at indsætte et nyt gen i et plasmid. Andre enzymer kan anvendes afhængigt af de specifikke detaljer i kloningsprocessen.