Måling af bakterievækst på petriskåle:en trin-for-trin guide

Af Palmer Owyoung · Opdateret 24. marts 2022

Bakterier dyrkes på agar i petriskåle og danner synlige kolonier, der repræsenterer grupper af celler. Mens en simpel kolonitælling kan give et hurtigt estimat af bakteriemængden, giver kvantitative metoder såsom levedygtige pladetællinger både absolutte tal og kvalitativ indsigt i, hvordan forskellige forhold påvirker væksten. Fordi en enkelt skål kan indeholde milliarder af celler, skal kulturen først seriefortyndes til et niveau, hvor individuelle kolonier kan tælles pålideligt.

Trin 1 – Seriel fortynding

Begynd i et sterilt 1,5 ml rør. Pipetter 10 µL af startkulturen ind i 90 µL sterilt fortyndingsmedium (f.eks. fosfatbufret saltvand). Forsegl røret, vortex forsigtigt, og du har en fortynding på 10⁻¹. Gentag 10µL overførslen til frisk 90µL medium for at generere en 10⁻² fortynding og så videre. Fortsæt, indtil du når en fortynding mellem 10⁻⁴ og 10⁻¹⁰. Mærk hvert rør (10‑1, 10‑2, …) for at holde styr på fortyndingsfaktoren.

Trin 2 – Plating

Tag 10 µL fra det mest fortyndede rør, der stadig giver tællelige kolonier (typisk 30-300 pr. plade). Spred inokulumet jævnt over agaroverfladen med en glasspreder, drej pladen 90° og gentag. Forbered mindst tre plader pr. fortynding for at sikre statistisk sikkerhed. Lad sprederen tørre på en flamme eller en bænk i et par minutter, sæt derefter lågene på igen og inkuber ved den optimale temperatur for organismen (normalt 35–37°C) i 12–16 timer.

Trin 3 – Kolonitælling

Efter inkubation inspiceres hver plade for et tælleligt antal kolonier. Marker bunden af ​​fadet (ikke låget) med en permanent markør ved hver kolonis position og mål prikkerne. Vælg plader, der indeholder mellem 30 og 300 kolonier for nøjagtig statistik.

Trin 4 – CFU-beregning

Beregn kolonidannende enheder (CFU) pr. milliliter af den oprindelige kultur ved hjælp af formlen:

CFU/mL = (antal kolonier) × 10×10ⁿ

hvor n er den negative eksponent for fortyndingsfaktoren (f.eks. for en 10⁻⁷ fortynding, n = 7). Faktoren 10 tegner sig for 10µL inokulumvolumenet.

Ting påkrævet

• Serielle fortyndingsmedier (f.eks. PBS eller tryptisk sojabouillon)
• Pipetter og sterile spidser
• Mikrocentrifugerør
• Agarplader med passende vækstmedium
• Hvirvelmixer
• Bunsen-brænder
• Glasspredere
• 70 % ethanol

TL;DR

Steriliser sprederen i 70% ethanol, antænd den med en bunsenbrænderflamme, lad alkoholen brænde af, og afkøl den på den tørre agaroverflade. Dette dræber eventuelle resterende mikrober før udpladning.

Sikkerhedsmeddelelse

Håndter alle bakteriekulturer som potentielt farlige. Følg institutionelle retningslinjer for biosikkerhed og brug passende personlige værnemidler.