Sådan beregnes HPLC-opløsninger

Kemikere bruger højtydende væskekromatografi eller HPLC til at adskille blandinger af forbindelser. Generelt består metoden af at injicere en prøve i en søjle, hvor den blandes med et eller flere opløsningsmidler. Forskellige forbindelser adsorberer eller "klæber" til kolonnen i forskellige grader; og når opløsningsmidlet skubber forbindelserne gennem søjlen, vil en af komponenterne i blandingen først forlade søjlen. Instrumentet detekterer forbindelserne, når de forlader søjlen og producerer et kromatogram, der består af et plot med retentionstid på x-aksen og signalintensitet fra detektoren på y-aksen. Når forbindelserne forlader søjlen, producerer de "toppe" i kromatogrammet. Generelt, jo længere fra hinanden og jo smalere toppe i kromatogrammet er, jo højere er opløsningen. Forskere overvejer en opløsning på 1,0 eller højere for at repræsentere en passende adskillelse.

Mål bredderne af to tilstødende toppe i kromatogrammet ved at bemærke, hvor x-akseværdierne er i bunden af hver top. X-aksen repræsenterer retentionstid, måles normalt i sekunder. Således, hvis en top begynder ved 15,1 sekunder og slutter ved 18,5 sekunder, er dens bredde (18,5 - 15,1) \u003d 3,4 sekunder.


Bestemm tilbageholdelsestiderne ved at notere tiden, dvs. placeringen på x- akse, der svarer til placeringerne af toppen af maksimumene. Denne værdi vil normalt være omtrent halvvejs mellem de to værdier, der bruges til at beregne bredden i trin 1. Eksemplet, der er givet i trin 1, vil for eksempel udvise et maksimum ved ca. 16,8 sekunder.


Beregn opløsningen, R , mellem to toppe efter


R \u003d (RT1 - RT2) /[0,5 * (W1 + W2)],


hvor RT1 og RT2 repræsenterer retentionstiderne for toppe 1 og 2, og W1 og W2 repræsenterer bredden af toppene taget ved deres baser. Fortsætter eksemplet fra trin 2 og 3, udviser en top en retentionstid på 16,8 sekunder og en bredde på 3,4 sekunder. Hvis den anden top udviste en retentionstid på 21,4 sekunder med en bredde på 3,6 sekunder, ville opløsningen være <<> R \u003d (21,4 - 16,8) /[0,5 * (3,4 + 3,6)] \u003d 4,6 /3,5 \u003d 1,3.