Hvad er ulemperne ved HPLC?

Højpræstationsvæskekromatografi (HPLC) er en laboratorieteknik, der anvendes til at adskille og identificere forbindelser. Det er en type søjlekromatografi, der afhænger af forskellige polariteter af forbindelser i en opløsning for at adskille dem. HPLC adskiller sig fra standard søjlekromatografi, fordi den bruger tryk for at tvinge opløsningen gennem søjlen hurtigere og producerer derfor hurtigere og nogle gange mere præcise resultater. Målet er at adskille forbindelser i søjlen og få dem til at gå separat.

Coelution

På grund af HPLC's hastighed og afhængighed af forskellige polariteter af forbindelser, er to forbindelser med lignende struktur og polariteter kan afslutte chromatografiapparatet samtidig eller næsten samme tid. Dette kaldes coelution. Coelution gør det muligt at bestemme præcis hvilken del af blandingen der elueres på hvilket tidspunkt, der er svært.

Adsorberede forbindelser

HPLC bruger typisk en glas kolonne fyldt med perler lavet af forskellige materialer. Blandingerne, der tvinges gennem søjlen, har kemikalier, der binder med forskellige styrker til perlerne. Styrken af ​​bindingen, som afhænger af ligheden i polaritet, bestemmer, hvor længe kemikaliet vil binde til perlen, inden det frigives. Nogle forbindelser binder så stærkt, at de i det væsentlige aldrig frigives fra perlerne i søjlen og aldrig måles i opløsningen, der forlader søjlen.

Omkostningsfri

​​Typiske laboratorieseparationsteknikker involverer udvikling af en analyse, eller separationsmetode og derefter implementere dette assay for at adskille individuelle forbindelser fra en opløsning. Dette resulterer dog normalt i flere løsninger, som også skal gennemgå procedurer, hvilket fører til en eksponentiel stigning i kompleksiteten. Skønt HPLC ofte kan forenkle og fremskynde denne proces, kan omkostningerne ved at udvikle et HPLC-apparat blive enorm. Udvikling af et HPLC-apparat, selv om det er meget mere effektivt, er meget dyrere end udvikling af andre analyser til separering af forbindelser. Dette gør det ikke økonomisk rentabelt for mange små privatejede laboratorier.

Kompleksitet

HPLC bruges ikke kun til at adskille simple forbindelser, men bruges også til at isolere specifikke proteiner ud af en cellulær blanding. I dette tilfælde overtrækkes perlerne i søjlen normalt med et antistof, der er specifikt for det protein, du skal samle. Proteinerne binder antistofferne, og den resterende opløsning føres gennem søjlen, hvorefter proteinerne frigives ved anvendelse af en anden opløsning og opsamles. Dette kræver en højt kvalificeret tekniker til at overvåge kolonnen til enhver tid og sørge for, at processen kører nøjagtigt som planlagt.