Hvad gør acetonealkohol til et gramfarvning?

Gram-pletten er en differentiel farvningsprocedure, der viser, hvilke bakterier der er Gram-positive eller Gram-negative baseret på deres pletfarve. Acetonalkohol er et reagens anvendt i denne proces for at tilvejebringe farvedifferentieringen. Gram-positive bakterier har et tykt peptidoglycan-lag og pletter lilla, mens gramnegative mikroorganismer har et lille eller intet peptidoglycan-lag og pletrosa.

Primærfarvet krystalviolet

bakterieprøven fremstilles, krystalviolet anvendes til at plette prøven først. På dette tidspunkt vil både gram-positive og gramnegative bakterier forekomme lilla. Normalt anbringes krystalviolen på glideren i 30 sekunder, før der vaskes overskydende plet med vand. Krystalviolen kan klæbe lidt til peptidoglycan-lagene, så ikke alle primære pletter vaskes ud med vandet.

Mordant-Iod

Jod tilsættes derefter til prøven i et minut . Det virker som en mordant, som tjener til at fixe farvestoffer i en farvningsproces. Jod udfører denne funktion ved at binde til krystalviolen og skabe et uopløseligt kompleks, der adhærer meget bedre til det tykke peptidoglycanlag, der findes i gram-positive bakterieceller end kun krystalviolen alene. Der er ikke et vaske trin med vand efter tilsætning af iod.

Affarvningsmiddel-Alkohol

Enten acetone eller ethylalkohol kan bruges som affarvningsmiddel. Alkoholen opløser lipider, der findes i den ydre cellemembran af gramnegative bakterier, hvilket gør det muligt for krystalviolet-iodkomplekset at lække ud af det tyndere peptidoglycan-lag. Alkoholen tilsættes i 10 til 20 sekunder; den hældes på diaset, indtil al jod er vasket væk og afrundingen er farveløs. På dette tidspunkt i Gram-farvningsprocessen er Gram-negative bakterier farveløse, mens Gram-positive bakterier stadig bevarer krystalviolen. Når du er færdig, skal diaset skylles med vand for at stoppe affarvningseffekten.

Counterstain-Safranin

Safranin tilsættes derefter for at øge synligheden og kontrasten til de farveløse gramnegative bakterier. Pletten får disse bakterier til at blive rosa under mikroskopet. Da pletten sættes til hele prøven, pletter den også Gram-positive bakterier, men den mørkere af krystalviolen skjuler den lysere safraninrosa farve. Når glideprøven er oversvømmet med safranin i ca. et minut, bruges vand til at vaske af overskydende plet, der ikke klæber til bakteriecellerne.