Kreatinfosfat syntetiseres fra kreatin og ATP i en reaktion, der katalyseres af enzymet kreatinkinase. Denne reaktion sker i mitokondrierne, som er de organeller, der er ansvarlige for energiproduktionen i cellen. Kreatinfosfat transporteres derefter til cytoplasmaet, hvor det bruges til at generere ATP, når det er nødvendigt.
Kreatinfosfat er et vigtigt molekyle for muskelfunktion, fordi det giver mulighed for hurtig generering af ATP. Dette er især vigtigt under højintensiv træning, hvor efterspørgslen efter ATP er høj. Kreatinfosfattilskud har vist sig at forbedre muskelpræstation i en række sportsgrene og aktiviteter.