Hvilke kemikalier og molekyler er nødvendige for PCR Hvad er funktionen af ​​hver komponent?

PCR -komponenter og deres funktioner:

1. Skabelon DNA:

* funktion: Den DNA -sekvens, du vil forstærke. Det fungerer som planen for polymeraseenzymet at kopiere.

2. Primere:

* funktion: Kort, enkeltstrengede DNA-sekvenser (typisk 18-30 nukleotider), der er komplementære til specifikke regioner på skabelon-DNA'et. De binder til skabelon -DNA og giver et udgangspunkt for DNA -polymerase.

3. DNA -polymerase:

* funktion: Et enzym, der syntetiserer nye DNA -strenge ved hjælp af skabelon -DNA og primere. Det tilføjer nukleotider til 3 'enden af ​​primeren i en 5' til 3 'retning.

4. Deoxynucleosid Triphosphates (DNTPS):

* funktion: Byggesten af ​​DNA. De består af fire typer:DATP, DCTP, DGTP og DTTP, der repræsenterer de fire baser (adenin, cytosin, guanin og thymin). DNA -polymerasen bruger disse til at samle de nye DNA -strenge.

5. Bufferopløsning:

* funktion: Indeholder salte og ioner, der opretholder den passende pH og ionstyrke til optimal DNA -polymeraseaktivitet.

6. Magnesiumchlorid (MGCL2):

* funktion: En cofaktor til DNA -polymerase, der kræves til dens katalytiske aktivitet. Det hjælper også med at stabilisere DNA -strukturen.

7. Vand:

* funktion: Opløsningsmiddel til reaktionen og tilvejebringer et medium for komponenterne til at interagere.

Her er en kort oversigt over PCR -processen:

1. denaturering: Reaktionsblandingen opvarmes til 94-98 ° C, der adskiller den dobbeltstrengede skabelon-DNA i enkeltstrenge.

2. udglødning: Temperaturen sænkes til 50-65 ° C, hvilket gør det muligt for primere at binde til deres komplementære sekvenser på det enkeltstrengede skabelon-DNA.

3. udvidelse: Temperaturen hæves til 72 ° C, den optimale temperatur for DNA -polymerasen. Polymerasen udvider primerne og tilføjer DNTP'er til at skabe nye DNA -strenge.

Disse tre trin gentages for flere cyklusser, hvilket resulterer i eksponentiel amplifikation af mål -DNA -sekvensen.