Sådan fungerer det:
1. I nærvær af kobberioner danner peptidbindinger et kompleks med kobberioner. Dette kompleks er farveløst .
2. ammoniak fungerer som en katalysator: Ammoniak tilsættes til reaktionsblandingen for at øge pH og gøre opløsningen mere alkalisk. Dette hjælper med at stabilisere det kompleks, der er dannet mellem kobberionerne og peptidbindingerne.
3. Dannelse af et farvet kompleks: Det kompleks dannet i trin 1 reagerer derefter med ammoniak for at danne A violet-farvet kompleks . Intensiteten af farven er direkte proportional med koncentrationen af de tilstedeværende peptidbindinger.
Ammoniak forårsager derfor ikke direkte farveændringen, men det er en vigtig komponent, der hjælper med dannelsen af det farvede kompleks af:
* Forøgelse af pH: Dette muliggør dannelse af det indledende kobber-peptidbindekompleks.
* stabilisering af komplekset: Det alkaliske miljø skabt af ammoniak hjælper med at stabilisere komplekset, hvilket fører til dannelsen af det farvede kompleks.
Så farveændringen i biuretreaktionen er et resultat af interaktionen mellem kobberioner, peptidbindinger og ammoniak.