Grunden til at farve et præparat på Microscope

Hovedårsagen til at du pletter en prøve inden du lægger den under mikroskopet, er at få et bedre kig på det, men farvning gør meget mere end blot fremhæve cellernes konturer. Nogle pletter kan trænge ind i cellevægge og fremhæve cellekomponenter, og dette kan hjælpe forskere med at visualisere metaboliske processer. Pletter hjælper også med at skelne mellem levende celler og døde. Desuden gør farvning det muligt for forskere at tælle antallet af celler af en bestemt type inden for en bestemt biomasse. Tyve eller flere forskellige slags pletter eksisterer, og hver har sin hensigt.

TL; DR (for lang, ikke læst)

Hovedformålet med farvning er at fremhæve celler og dele af celler. Over 20 forskellige typer pletter findes, og den type plet du bruger afhænger af, hvad du leder efter.

Typer af pletter

Valget af plet afhænger, hvad du leder efter. Ikke alle pletter er egnede til levende celler, men dem, der indbefatter Bismarck brun, toluenrød, Nile Blue og Nile Red, og visse fluorescenter bruges til at fremhæve DNA. Nogle pletter markerer sporer, nogle opdager lipider og proteiner, og nogle ændrer farve i nærvær af stivelse. Formålet med undersøgelsen bestemmer den bedste type plet til brug. For eksempel vil en læge, der udfører en PAP-smøring, bruge Eosin Y. Det er et surt fluorescerende farvestof, der bliver rødt, når det kommer i kontakt med røde blodlegemer, cytoplasma og cellemembraner. Det bruges også til at teste blodmargen.

I nogle tilfælde kan en efterforsker bruge mere end en plet. For eksempel er hæmatoxylin en plet, som forvandler cellekerner blå. Når det bruges sammen med eosin, som gør de andre dele af cellen rød eller lyserød, giver den en stærkere kontrast og gør kerne lettere at differentiere. PAP-udtværinger og blodmargeprøver er nemmere at undersøge, når disse to pletter anvendes sammen.

Grams flade: Hospitalarbejdere bruger Grams plet til at identificere skadelige bakterier. Dette er faktisk en række farvestoffer, der har forskellige virkninger på forskellige typer bakterier og giver læger et vigtigt diagnostisk værktøj. Grams plet er en tredelt proces. I det første tilføjes Hucker's krystalviolet, som pletter alle bakterier en ensartet violet farve. I den næste fase tilsættes iodflekken, hvilket får farven til at klæbe til Gram-positive celler, som primært er Staphylococcus og Streptococcus. Pletten vaskes væk, hvilket efterlader de gram-positive celler med en tydelig violet farve; derefter introduceres en tredje plet, Safranine O, for at forbedre kontrasten mellem de gramnegative bakterier og resten af ​​materialet i diaset.

Farvningsprocedure

Ved fremstilling af en prøve på en glide, du kan tørre-mount eller vådmontere det, du kan skære det i et tyndt afsnit eller du kan smøre det. Når du bruger en plet, er den sædvanlige procedure at vådmontere prøven, hvilket betyder at placere en dråbe vand på diaset, sæt prøven i vandet og dæksel det med et dækslip. Du anvender pletten til et hjørne af diaset med en dråber og gør det muligt at trække det mod prøven ved kapillarvirkning. Det hjælper med at lægge et papirhåndklæde på den modsatte side af diaset for at tiltrække vandet. Når pletten har spredt sig over hele glideren, er prøven klar til undersøgelse.