Sådan beregnes Vmax Lineweaver

Enzymer er proteiner, der arbejder for at sænke aktiveringsenergien i kemiske reaktioner, mens de ikke indtages i reaktionen. Biologisk er enzymer essentielle molekyler, der fremskynder reaktionerne i metaboliske systemer. Som et resultat heraf undersøger enzymkinetikken reaktionshastigheden af ​​enzymer i forskellige kemiske indstillinger. Mange faktorer påvirker et enzyms hastighed. Koncentrationen af ​​et substrat, temperatur, inhibitorer og pH påvirker tærsklen af ​​et enzym i en kemisk reaktion. Med hjælp af lineære relationer som Lineweaver-Burk-plot, kan du finde den maksimale hastighed af et enzym.
Brugervenlighed til beregning af Vmax i Lineweaver-Burk Plot

Begynd med at plotte Michaelis-Menten ligning for at få en hyperbole kurve. Brug derefter den gensidige af Michaelis-Menten ligningen til at opnå en hældningsaflytningsform af enzymaktiviteten. Dernæst vil du få tak i enzymaktiviteten som 1 /Vo = Km /Vmax (1 /[S]) + 1 /Vmax, hvor Vo er begyndelseshastigheden, Km er dissociationskonstanten mellem substratet og enzymet Vmax er den maksimale hastighed, og S er koncentrationen af ​​substratet.

Da hældningsafskærmningen svarer til hastigheden til substratets koncentration, kan du bruge den typiske formel for y = mx + b, hvor y er den afhængige variabel, m er hældningen, x er den uafhængige variabel, og b er y-afsnit. Før du bruger en bestemt computersoftware, skal du bruge grafpapir til at tegne linjen. Nu bruger du typisk databaseprogram til at plotte ligningen. Så ved at kende den oprindelige sats, Vo og den forskellige koncentration af substratet, kan du oprette en lige linje. Linjeplotten repræsenterer hældningen af ​​Km /Vmax og y-afsnit af 1 /Vmax. Brug derefter den gensidige af y-interceptet til at beregne Vmax af enzymaktiviteten.
Sciencing Video Vault
Opret den (næsten) perfekte beslag: Sådan gør du den (næsten) perfekte beslag: Her er Hvordan anvendes til Lineweaver-Burk Plot

Inhibitorer ændrer maksimalhastigheden af ​​enzymaktiviteten hovedsagelig på to måder: konkurrencedygtigt og ikke-konkurrencedygtigt. En konkurrencedygtig inhibitor binder til aktiveringsstedet for et enzym, der blokerer substratet. På denne måde konkurrerer inhibitoren med substratet for at binde til enzymstedet. At tillade høj koncentration af den konkurrencedygtige hæmmer sikrer bindingen til stedet. Derfor ændrer den konkurrerende inhibitor dynamikken i den enzymatiske hastighed. For det første ændrer inhibitoren hældningen og x-afsnit Km, hvilket skaber en meget stejlere hældning. Den maksimale sats, Vmax, forbliver imidlertid den samme.

På den anden side binder en noncompetitive inhibitor på et andet sted end enzymets aktiveringssted og konkurrerer ikke med substratet. Inhibitoren modificerer strukturelle komponenter af aktiveringsstedet, der forhindrer substratet eller et andet molekyle i at binde til stedet. Denne ændring påvirker substratets affinitet til enzymet. Ikke-kompetitive inhibitorer ændrer hældningen og y-interceptet på Lineweaver-Burk-plottet, hvilket reducerer Vmax, mens du øger y-afsnit med en stejlere hældning. Imidlertid forbliver x-intercept det samme. Selvom Lineweaver-Burk-plottet er nyttigt på mange måder, har linjeplottet begrænsninger. Desværre begynder plottet at fordreje satser ved meget høje eller lave substratkoncentrationer, hvilket skaber ekstrapoleringer på plottet