Sådan beregnes cellekoncentration

Forskere og teknikere skal ofte beregne koncentrationen af ​​celler i en suspension. Når en patient f.eks. Får sit blod trukket på en lægekontor, kan laboratoriet anvende visse metoder til at søge mængden af ​​hvide blodlegemer i et givet blodvolumen. Dette giver lægen en masse information om helbredet om hendes patient, især hans immunsystem, og om han kæmper for en infektion eller en anden sygdom. Test som dette kan lede efter mange andre celler i blod såvel som spinalvæske og andre kropsvæsker, såsom sædceller i sæd til fertilitetsformål. Forskere beregner også cellekoncentrationer af bakterier, gær og andre mikroorganismer til adskillige formål lige fra økologisk forskning til industrielle teknologier. En af de mest almindelige teknikker er også undervist i mange kollegiumbiologi klasser, og det bruger en enhed kaldet et tællekammer.

Udtynding af prøven

Før cellesuspensionen kan gå ind i tællekammeret , det kan have brug for fortynding, fordi det kunne indeholde tusinder eller millioner af celler. I så fald kan cellerne ikke med rimelighed tælles. For at fortynde prøven, brug en steril pipette til at placere ti mikroliter af celleopløsningen i et reagensglas indeholdende 90 mikroliter af et fortyndingsmiddel. Typen af ​​fortyndingsmiddel vil afhænge af typen af ​​celle. Bland det godt. Denne opløsning er nu ti gange mere fortyndet end den indledende prøve, så dens fortyndingsfaktor er 10 ^{-1. Mærk det. Gentag dette flere gange med en steril pipette hver gang, indtil opløsningen er fortyndet nok. Hvis du fortyndede det en anden gang, var det andet testrør 100 gange mere fortyndet end den oprindelige opløsning, så fortyndingsfaktoren var 10 -2 og så videre.}

Tælling af cellerne

Du må muligvis prøve flere fortyndinger for at bestemme den rigtige fortyndingsfaktor for tællerkammeret. Et tællekammer er dybest set en meget lille, klar, rektangulær æske med en præcis dybde og et præcist gitter indskrevet på tværs af toppen. Det er også kendt som et hæmocytometer, eller nogle gange et hæmacytometer. Målet er, at suspensionen skal være fortyndet nok, at når der ses i tællekammeret, overlapper ingen celler, og de fordeles i hele nettet på ensartet måde. Pipetter den fortyndede suspension indeholdende cellerne i brønden i tællekammeret, hvor den vil sætte sig ind i gitterkammeret gennem kapillarvirkning. Placer tællekammeret på mikroskopfasen og se det under lav effekt.

Gitteret indeholder kvadrater, der er lavet af endnu mindre firkanter. Vælg cirka fire eller fem firkanter, eller hvor mange du skal tælle mindst 100 celler i et mønster efter eget valg, som f.eks. De fire hjørner og et centerfelt. Hvis cellerne er store, kan disse være de store firkanter, men hvis cellerne er små, kan du vælge de mindre firkanter i stedet.

Beregningskoncentration

Det specifikke volumen for hvert gitterfirkant kan varierer af tællerkammerproducenten, men dybden af ​​kammeret er ofte 0,1 millimeter, arealet af de store kvadrater er 1 kvadrat millimeter, og arealet af de mindre kvadrater er 0,04 kvadrat millimeter. De større firkanter har så et volumen på 0,1 cubic millimeter. For dette eksempel antager du i alt 103 celler i fem firkanter, og at du fortyndede den indledende prøve, indtil fortyndingsfaktoren var 10 ^-2.

Hvis hvert gitterfelt har et volumen på 0,1 kubikmilimeter og fem tælles, så blev det totale rumfang af kammeret, der blev talt, 0,5 kubikmeter, og der var 103 celler. Fordublet for at gøre det 1 kubik millimeter ville gøre det 206 celler. En kubikcentimeter svarer til 1 milliliter, hvilket er en nyttig måling for væsker. Der er 1.000 kubikmeter i en kubikcentimeter. Hvis du havde haft en kubikcentimeter eller en milliliter suspension, ville du derfor have talt 206.000 (206 x 1.000) celler. Sådan ser det ud som en ligning:

Antal kvadratfelt × Antal kvadrater tælles = Total volumen af ​​tællet suspension

Antal celler ÷ Antal tæller suspension = Celleantal pr. Millimeter cubed

Cell count per millimeter cubed × 1000 = celletælling per milliliter

Beregning af ufortyndet koncentration

Du skal tage højde for enhver fortynding, der udføres for at gøre initialopløsningen tællelig under mikroskopet. I dette eksempel er fortyndingsfaktoren 10 ^{-2. For at beregne opløsningens initialkoncentration:}

Celltælling pr. Milliliter ÷ fortyndingsfaktor = Cellekoncentration

For dette eksempel er celleantalet per milliliter 206.000 og fordeler det med 10 ^{-2 (0,01) giver en cellekoncentration på 20.600.000 celler pr. Milliliter i den indledende prøve.}