Hvad er princippet om Glucose-6-phosphat dehydrogenase?

Princippet for glucose-6-phosphat dehydrogenase (G6PD) assay er baseret på den enzymatiske reaktion katalyseret af G6PD. G6PD er et enzym, der spiller en afgørende rolle i pentosephosphatvejen, en metabolisk vej, der er ansvarlig for at generere NADPH, et reduktionsmiddel.

I dette assay katalyserer G6PD oxidationen af ​​glucose-6-phosphat (G6P) til 6-phosphogluconat (6-PG) ved hjælp af NADP+ som en elektronacceptor. Under denne reaktion reduceres NADP+ til NADPH, som udviser en stærk absorbans ved 340 nm. Ved at måle stigningen i absorbans ved 340 nm over tid kan enzymaktiviteten af ​​G6PD kvantificeres.

Her er de vigtigste trin involveret i G6PD-analysen:

1. Prøveforberedelse: En prøve indeholdende G6PD, såsom et cellelysat eller vævshomogenat, fremstilles.

2. Reaktionsblanding: Reaktionsblandingen inkluderer typisk G6P, NADP+, en bufferopløsning og prøven indeholdende G6PD.

3. Inkubation: Reaktionsblandingen inkuberes ved en specifik temperatur og pH, hvilket tillader den enzymatiske reaktion at finde sted.

4. Spektrofotometrisk måling: Absorbansen af ​​reaktionsblandingen måles ved 340 nm under anvendelse af et spektrofotometer. Denne absorbansaflæsning svarer til mængden af ​​produceret NADPH.

5. Beregninger: Ændringen i absorbans ved 340 nm over tid bruges til at beregne enzymaktiviteten af ​​G6PD. Denne beregning tager hensyn til ekstinktionskoefficienten for NADPH og volumenet af reaktionsblandingen.

6. Enzymaktivitetsenheder: G6PD-aktivitet er almindeligvis udtrykt i enheder pr. liter (U/L) eller internationale enheder pr. liter (IU/L), hvor en enhed enzymaktivitet repræsenterer den mængde enzym, der kræves for at producere 1 mikromol NADPH pr. minut under de specificerede assaybetingelser .

Målingen af ​​G6PD-aktivitet har klinisk betydning, da mangler i G6PD kan føre til en tilstand kendt som G6PD-mangel, som forårsager hæmolytisk anæmi, når den udsættes for visse medikamenter eller stoffer. G6PD-assays udføres for at diagnosticere G6PD-mangel og overvåge enzymaktivitet hos personer med tilstanden.