Hvad er funktionen af ​​ascorbinsyre i DNA-ekstraktion?

1. Antioxidant:Ascorbinsyre er en potent antioxidant, der hjælper med at beskytte DNA mod oxidativ skade. Under DNA-ekstraktionsprocedurer kan forskellige reagenser og miljøfaktorer generere reaktive oxygenarter (ROS), der kan forårsage DNA-oxidation og strengbrud. Ascorbinsyre fjerner disse frie radikaler og minimerer DNA-skader og bevarer derved integriteten af ​​det ekstraherede genetiske materiale.

2. Reduktionsmiddel:Ascorbinsyre gennemgår redoxreaktioner og virker som et reduktionsmiddel ved DNA-ekstraktion. Det hjælper med at opretholde det reducerende miljø, der er nødvendigt for nogle DNA-ekstraktionsmetoder, især dem, der involverer brugen af ​​visse lyseringsbuffere eller chelateringsmidler. Ved at reducere de oxidationsmidler, der er til stede i ekstraktionsbufferne, forhindrer ascorbinsyre oxidationen af ​​DNA og letter dens effektive ekstraktion.

3. Hæmning af nukleaser:Nukleaser er enzymer, der kan nedbryde DNA, hvilket potentielt kompromitterer udbyttet og kvaliteten af ​​ekstraheret DNA. Ascorbinsyre har hæmmende virkninger på nogle nukleaser, såsom DNaser og RNaser. Ved at hæmme aktiviteten af ​​disse nukleaser hjælper ascorbinsyre med at bevare integriteten af ​​DNA-molekyler under ekstraktionsprocessen, hvilket reducerer risikoen for DNA-nedbrydning.

4. Forøgelse af DNA-udfældning:Ascorbinsyre kan øge udfældningen af ​​DNA efter ekstraktion. Dette er især relevant i metoder, der anvender alkoholudfældning til at isolere DNA. Ascorbinsyre fremmer dannelsen af ​​tætte og kompakte DNA-udfældninger, hvilket gør det lettere at opsamle DNA-pillen under centrifugering. Dette letter de efterfølgende trin af DNA-oprensning og downstream-applikationer.

Samlet set bidrager ascorbinsyre til beskyttelse, stabilisering og effektiv ekstraktion af DNA ved at fungere som en antioxidant, reduktionsmiddel, nukleaseinhibitor og præcipitationsforstærker. Dets inkludering i DNA-ekstraktionsprotokoller hjælper med at sikre integriteten og kvaliteten af ​​det ekstraherede genetiske materiale til forskellige molekylærbiologiske anvendelser.