Hvad er forudfarvede proteiner?

Forfarvede proteiner:Klar til brug proteinmarkører til gelelektroforese

Pre-farvede proteiner er proteinblandinger, der er blevet kovalent knyttet til et farvestof . Dette gør det muligt for dem at blive visualiseret direkte på en gel eliminering af behovet for separate farvningsprocedurer. De bruges ofte som molekylvægtmarkører I gelelektroforese, især SDS-PAGE (Natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese).

Her er en sammenbrud af vigtige aspekter:

1. Hvorfor bruge præfarvede proteiner?

* Bekvemmelighed: Ingen separat farvning krævet, spare tid og kræfter.

* visuel sporing: Giver dig mulighed for at spore fremskridt med din proteinseparation under elektroforese.

* Bestemmelse af nøjagtig størrelse: Tilvejebringer referencepunkter til bestemmelse af molekylvægten af ​​ukendte proteiner.

* Fejlfinding: Kan hjælpe med at identificere potentielle problemer i din elektroforeseopsætning, som forkert gelbelastning eller ujævn kørsel.

2. Hvordan førfarvede proteiner fungerer:

* farvestof konjugering: Proteinerne er kovalent knyttet til et farvestof, normalt et fluorescerende eller farvet farvestof.

* Elektroforetisk mobilitet: Farvestoffet ændrer ikke signifikant proteinets elektroforetiske mobilitet, hvilket betyder, at de migrerer i henhold til deres molekylvægt.

* visualisering: Farvestoffet tillader direkte visualisering af proteinbåndene på gelen, enten under UV -lys eller med synligt lys.

3. Nøglefunktioner ved forudfarvede proteiner:

* molekylvægtområde: Fås i forskellige intervaller, der passer til forskellige eksperimentelle behov.

* farvestofegenskaber: Det anvendte farvestof påvirker båndets følsomhed og synlighed.

* stabilitet: Nogle forudfarvede proteiner er mere stabile end andre og kan modstå barske forhold.

* Kompatibilitet: Sørg for kompatibilitet med din elektroforese -puffer og geltype.

4. Anvendelser af forudfarvede proteiner:

* SDS-PAGE molekylvægt markører: Den mest almindelige anvendelse.

* Western blotting: Brugt som størrelsesreference for overførte proteiner.

* Proteinoprensning Overvågning: At spore proteinmigration under oprensningsprocedurer.

* gelelektroforese Fejlfinding: Hjælp med at diagnosticere problemer som ujævn gelbelastning.

5. Typer af forudfarvede proteinmarkører:

* regnbue markører: Indeholder en blanding af proteiner med forskellige farver for let identifikation af hvert bånd.

* enkeltfarvemarkører: Indeholder et enkelt farvestof og giver mindre visuel differentiering, men kan være nyttig til specifikke applikationer.

6. Fordelene ved at bruge forudfarvede proteiner:

* forenklet arbejdsgang: Eliminerer separate farvningstrin, hvilket sparer tid og kræfter.

* visuel sporing: Tillader realtidsovervågning af proteinseparation under elektroforese.

* Bestemmelse af pålidelig størrelse: Tilvejebringer nøjagtige referencer til molekylvægt.

* Fejlfindingshjælp: Hjælper med at identificere potentielle problemer i elektroforeseopsætningen.

7. Ulemper ved at bruge forudfarvede proteiner:

* Omkostninger: Kan være dyrere end traditionelle proteinstandarder.

* Følsomhed: Er måske ikke så følsomme som traditionelle proteinstandarder, især for proteiner med lav overflod.

* farvestofinterferens: Farvestoffet kan forstyrre visse nedstrøms applikationer, såsom proteinsekvensering eller massespektrometri.

Generelt er førfarvede proteiner et praktisk og værdifuldt værktøj til forskere, der arbejder med gelelektroforese. De giver en enkel og pålidelig måde at spore proteinmigration og bestemme molekylvægt på. Det er dog vigtigt at vælge den relevante markør til din specifikke applikation og overveje de potentielle begrænsninger.