Hvorfor anvendes ethanol på 75 procent i RNA -ekstraktion?

Her er hvorfor:

* RNA -nedbør: Ethanol hjælper med at udfælde RNA fra opløsning. RNA er meget opløseligt i vand, men når ethanol tilsættes, reducerer det opløseligheden af ​​RNA, hvilket får den til at komme ud af opløsningen som et fast bundfald.

* vask af urenheder: Under vasketrinnet hjælper ethanol med at fjerne forurenende stoffer, såsom salte, proteiner og andet cellulært affald, der kan være til stede i RNA -prøven.

hvordan det fungerer:

1. dehydrering: Ethanol er et dehydreringsmiddel, hvilket betyder, at det fjerner vand fra opløsningen. Denne reduktion i vandindhold sænker opløseligheden af ​​RNA, hvilket fører til nedbør.

2. salteffekt: I de fleste RNA -ekstraktionsprotokoller tilsættes en saltopløsning som natriumacetat før ethanol. Dette salt hjælper med at neutralisere den negative ladning af RNA -molekylet, hvilket gør det mindre opløseligt i vand og mere sandsynligt at udfælde.

3. Selektivitet: Mens ethanol udfælder RNA, udfælder det ikke DNA som effektivt. Dette hjælper med at sikre, at den endelige RNA -prøve er relativt fri for DNA -kontaminering.

Vigtige overvejelser:

* ethanolkoncentration: Koncentrationen af ​​ethanol anvendt i RNA -ekstraktion er afgørende. For lav af en koncentration er muligvis ikke effektiv til at udfælde RNA, mens for høj af en koncentration kan føre til udfældning af andre uønskede komponenter. 75% ethanol bruges ofte, fordi den giver en optimal balance til nedbør og vask.

* Temperatur: Ethanoludfældning udføres typisk ved lave temperaturer, ofte på is eller ved 4 ° C, for at minimere nedbrydning af RNA.

Generelt spiller 75% ethanol en kritisk rolle i RNA -ekstraktion ved at udfælde RNA fra opløsning og vaske kontaminanter, hvilket sikrer isolering af rent og intakt RNA.