Hvad er brugen af ​​chloroform i DNA -ekstraktion fra organismer?

historisk , Chloroform blev anvendt som en del af A phenol-chloroform-ekstraktion metode. Sådan fungerede det:

* Cellelyser: Det første trin involverede at bryde cellerne op for at frigive DNA'et.

* phenol: Phenol blev derefter tilsat til blandingen. Phenol er en stærk denaturant, der adskiller proteiner fra DNA'et.

* chloroform: Chloroform blev tilføjet for at skabe et bifasisk system , hvilket betyder to lag dannet. Det øverste lag indeholdt den vandige opløsning med DNA'et, mens det nederste lag indeholdt phenol og denaturerede proteiner.

hvorfor chloroform bruges ikke længere:

* sikkerhed: Chloroform er en giftig og kræftfremkaldende forbindelse, der udgør en betydelig risiko for forskere.

* Effektivitet: Moderne metoder som spin-søjler eller magnetisk perlebaseret ekstraktion er meget hurtigere, lettere og sikrere end phenol-chloroformmetoder. Disse teknikker er afhængige af forskellige principper for at isolere DNA.

I stedet for chloroform bruger moderne DNA -ekstraktion:

* buffere: Buffere bruges til at skabe den rigtige pH- og saltkoncentration til Lyse -celler og separat DNA fra andre cellulære komponenter.

* enzymer: Enzymer som proteinase K bruges til at fordøje proteiner, hvilket yderligere adskiller DNA fra andre cellulære komponenter.

* spin -søjler eller magnetiske perler: Disse materialer binder til DNA, hvilket muliggør dets isolering og oprensning fra resten af ​​prøven.

I resumé, mens chloroform engang blev anvendt i DNA -ekstraktion, betragtes det ikke længere som en sikker eller effektiv metode. Moderne DNA -ekstraktionsteknikker anvender alternative metoder til at opnå de samme resultater med større sikkerhed og lethed.