Hvorfor påvirker pH -adskillelse af aminosyrer ved elektroforese?

* aminosyrer har ioniserbare grupper: Hver aminosyre har mindst to ioniserbare grupper:en carboxylgruppe (-COOH) og en aminogruppe (-NH2). Disse grupper kan vinde eller miste protoner (H+) afhængigt af pH i opløsningen.

* isoelektrisk punkt (PI): Hver aminosyre har en specifik pH -værdi kaldet det isoelektriske punkt (PI), hvor dens nettoafgift er nul. På denne pH findes aminosyren som en zwitterion (både positive og negative ladninger afbalanceret).

* migration i et elektrisk felt: Når de udsættes for et elektrisk felt under elektroforese, vil aminosyrer med en nettopositive ladning migrere mod den negative elektrode (katode), mens de med en netto negativ ladning migrerer mod den positive elektrode (anode).

* ph -effekt på opladning:

* ph under pi: Aminosyren vil blive protoneret og bære en nettopositiv ladning.

* ph over PI: Aminosyren vil blive afprotoneret og bærer en netto negativ ladning.

* ph ved pi: Aminosyren har ingen nettoafgift og migrerer ikke.

Derfor påvirker pH af den pufferopløsning, der anvendes i elektroforese, direkte adskillelsen af ​​aminosyrer:

* Optimal adskillelse: Brug af en pH, der er lidt forskellig fra pi af aminosyrerne, sikrer, at de har en nettoafgift og vil migrere i forskellige hastigheder, hvilket fører til effektiv adskillelse.

* Dårlig adskillelse: Hvis pH er for tæt på pi af en aminosyre, vil den have en meget lav nettoopladning og vil migrere langsomt, hvilket resulterer i dårlig opløsning.

* Ingen adskillelse: Hvis pH er nøjagtigt ved pi af en aminosyre, vil den ikke have nogen nettoafgift og overhovedet ikke migrere.

Afslutningsvis er pH en kritisk faktor i elektroforese, fordi den bestemmer ladetilstanden for aminosyrer, påvirker deres migration i det elektriske felt og i sidste ende diktere separationseffektiviteten.