Bruges til at mærke DNA og protein i eksperimenter?

Der er en række teknikker, der bruges til at mærke DNA og proteiner i eksperimenter, hver med sine egne fordele og anvendelser. Her er en sammenbrud af nogle almindelige mærkningsmetoder:

DNA -mærkning:

* Radioaktiv mærkning:

* Typer:

* nick -oversættelse: Bruger DNA -polymerase til at inkorporere radioaktive nukleotider i DNA -fragmenter.

* tilfældig primermærkning: Bruger tilfældige hexamer -primere og DNA -polymerase til at inkorporere radioaktive nukleotider.

* Fordele: Meget følsomme, vidt anvendt i hybridiseringsassays og sydlig blotting.

* Ulemper: Kræver håndtering af radioaktive materialer, potentielle sikkerhedsmæssige bekymringer.

* fluorescerende mærkning:

* Typer:

* fluorescerende farvestoffer:

* Ethidium bromid (ETBR) binder til DNA og fluorescerer under UV -lys.

* SYBR Green I er et mere følsomt farvestof med mindre toksicitet end ETBR.

* fluorescerende mærkede nukleotider: Disse kan inkorporeres under PCR eller andre DNA -syntesemetoder.

* Fordele: Høj følsomhed, ikke-radioaktive, flere fluorescerende farvestoffer muliggør multiplexing.

* Ulemper: Kan være mindre følsom end radioaktiv mærkning, farvestofvalg kan påvirke følsomhed og anvendelser.

* Biotin -mærkning:

* Typer:

* biotinylerede nukleotider: Kan inkorporeres under PCR eller andre DNA -syntesemetoder.

* Fordele: Ikke-radioaktivt tillader detektion med høj følsomhed ved anvendelse af streptavidin-konjugerede enzymer eller fluorescerende sonder.

* Ulemper: Kan være mindre følsomme end nogle fluorescerende farvestoffer, kan kræve yderligere trin for at detektere biotin.

Proteinmærkning:

* Radioaktiv mærkning:

* Typer:

* Metabolisk mærkning: Celler dyrkes i medier, der indeholder radioaktive aminosyrer, hvilket gør det muligt for proteiner at inkorporere etiketten.

* in vitro -mærkning: Proteiner kan mærkes direkte med radioaktive isotoper.

* Fordele: Høj følsomhed, der bruges i mange anvendelser som proteinekspressionsundersøgelser og bindingsassays.

* Ulemper: Kræver håndtering af radioaktive materialer, potentielle sikkerhedsmæssige bekymringer.

* fluorescerende mærkning:

* Typer:

* fluorescerende farvestoffer:

* Direkte mærkning: Farvestoffer binder direkte til specifikke aminosyrerester eller tags.

* indirekte mærkning: Antistoffer eller andre bindingsmolekyler mærket med fluorescerende farvestoffer bruges til at målrette proteiner.

* Fordele: Høj følsomhed, ikke-radioaktive, flere fluorescerende farvestoffer muliggør multiplexing.

* Ulemper: Farvestofvalg kan påvirke følsomhed og applikationer.

* Biotin -mærkning:

* Typer:

* Biotinylering af proteiner: Proteiner kan direkte biotinyleres ved anvendelse af enzymer eller kemiske reaktioner.

* Fordele: Ikke-radioaktivt tillader detektion med høj følsomhed ved anvendelse af streptavidin-konjugerede enzymer eller fluorescerende sonder.

* Ulemper: Kan være mindre følsomme end nogle fluorescerende farvestoffer, kan kræve yderligere trin for at detektere biotin.

Andre teknikker:

* Affinitetsmærkning: Involverer anvendelse af en specifik ligand eller antistof til at mærke et protein eller DNA.

* klik kemi: Anvender bioorthogonale reaktioner til mærkning med unikke funktionelle grupper.

Valg af den rigtige mærkningsmetode:

Den bedste mærkningsmetode afhænger af det specifikke eksperiment og dets mål. Faktorer, der skal overvejes, inkluderer:

* Følsomhed: Hvor meget signal er nødvendig til detektion.

* applikationer: Teknikken skal være kompatibel med de tilsigtede nedstrøms applikationer.

* Omkostninger: Omkostningerne ved reagenser og udstyr.

* sikkerhed: Radioaktiv mærkning kræver særlige forholdsregler.

* Tilgængelighed af udstyr: Nogle teknikker kræver specialudstyr.

Fortæl mig, hvis du gerne vil have flere oplysninger om en bestemt mærkningsteknik, eller vil diskutere dens applikationer mere detaljeret!