Direkte forberedelse af en ren bakteriekultur:Trin-for-trin-vejledning

Jupiterimages/Photos.com/Getty Images

Den menneskelige krop er vært for omkring ni gange flere bakterieceller end menneskelige celler. I mikrobiologi, en ren kultur refererer til et laboratoriepræparat - såsom en petriskål - der indeholder en enkelt bakterieart. Identifikation og isolering af denne art er afgørende for nøjagtig karakterisering og downstream-applikationer.

John Foxx/Stockbyte/Getty Images

1. Steriliser inokuleringsløkken

Tænd en bunsenbrænder og før podningsløkken gennem den varmeste del af flammen, indtil den lyser rødt. Dette trin eliminerer eventuelle resterende mikrober.

2. Saml bakterier op

Lad løkken køle af i ca. 10 sekunder, og dyp den derefter forsigtigt i den mikrobielle prøve.

3. Første stribe

Åbn agarpladen, og stryg løkken frem og tilbage henover cirka en tredjedel af pladens overflade. Gensteriliser løkken i flammen.

4. Anden stribe

Rør løkken til et uinokuleret område af agaren for at afkøle den. Drej pladen, så den inokulerede sektion ligger til venstre eller højre, og skub derefter løkken gennem det podede område og hen over den øverste tredjedel af den resterende overflade flere gange. Gensteriliser løkken.

5. Tredje streak

Afkøl løkken på et rent område af agaren, drej pladen yderligere 90°, og træk løkken gennem den tidligere inokulerede zone, før du fejer hen over det resterende uinokulerede område.

6. Inkuber pladen

Placer pladen i en inkubator (eller ved stuetemperatur) og vent, indtil synlige kolonier vises - typisk 24 til 48 timer eller længere afhængigt af organismen.

7. Overfør de isolerede bakterier

Gensteriliser en ny inokuleringsløkke. Rør den til en enkelt, velformet koloni på pladen, og overfør den derefter til et skrå agarrør eller et rør med næringsbouillon.

8. Inkuber den rene kultur

Inkuber skrå eller bouillon under de samme betingelser som før. Efter tilstrækkelig vækst vil kulturen være et rent bakteriepræparat.

Ting påkrævet

• Mikrobiel prøve
• Inokuleringsløkke
• Bunsen-brænder
• Agarplade
• Skrå agarrør eller næringsbouillon

TL;DR (for lang; læste ikke)

Udstrygning af en plade i successive trin fortynder bakteriemængden, hvilket tillader individuelle kolonier at dannes. Undgå overdreven krydskontaminering mellem stribezoner. Inkubation kan forekomme ved stuetemperatur, men ved at bruge en kontrolleret inkubator optimeres vækstbetingelserne for den specifikke organisme.

Advarsel

Når du arbejder med ukendte mikroorganismer, er sikkerheden altafgørende:Bær handsker, steriliser overfladerne grundigt efter eksponering, og sørg for, at inokuleringsløkken er steriliseret før og efter hvert trin.

Br
Br
Br