Grundlæggende komponenter af en HPLC

Højtryksvæskekromatografi er en teknik til laboratorieanalyse af en blanding. Det er en effektiv type kromatografi, der bruger højt tryk, snarere end blot tyngdekraften, til at fremdrive en prøve af en blanding gennem en søjle. En prøve injiceres, så hjælper en pumpe, der indeholder store mængder tryk, at bevæge prøven langs en pakket kolonne, hvor den adskilles i individuelle komponenter. Denne adskillelse analyseres derefter af en detektor for at give resultater.

Injektionssted

For at blive injiceret i en HPLC, skal en prøve først opløses i et polært flydende opløsningsmiddel, fortrinsvis et med kendte HPLC spektre, så dets data kan skelnes fra prøven. Den væskeopløsning, der indeholder prøven, placeres i instrumentet og sendes ind i søjlen. Den aktuelle placering af injektionsstedet afhænger af instrumentets mærke. I de fleste tilfælde automatiseres injektionsprocessen, men i nogle tilfælde skal en laboratoriearbejder injicere prøven ved hjælp af en lille sprøjtenål.

Pumpe Komponent

Pumpekomponenten i HPLC-enheden er nødvendig fordi det giver det tryk, der fremdriver prøven gennem søjlen. Pumpens styrke varierer, men en kraftig kan producere et tryk på op til 6.000 psi eller pund pr. Kvadrat tomme, som påføres efter prøven injiceres. Dette gør det muligt for prøven at passere gennem kolonnen hurtigere og mere effektivt end hvis den skulle dryppe gennem kun at bruge tyngdekraften.

Kolonnebeskrivelse

Den øgede hastighed af en prøve passeret gennem kolonne ved hjælp af en pumpe gør det muligt at anvende en anden type søjle end dem der anvendes ved simpel væskekromatografi. Pakningsmaterialet i søjlen kan have en meget mindre partikelstørrelse, hvilket øger overfladearealet og hjælper derfor interaktioner af prøven med søjlen. De fleste HPLC-søjler arbejder gennem polaritet. Prøven opløses i et polært opløsningsmiddel, og søjlen består af stort set ikke-polære carbonhydrider. De polære dele af prøve molekylet passerer meget hurtigt gennem søjlen, fordi de primært interagerer med opløsningsmidlet, mens prøveens ikke-polære komponenter hviler i søjlen og danner svage interaktioner med søjlekomponenterne. Derfor kommer prøveens komponenter ud af søjlen i rækkefølge fra de fleste polære til de fleste ikke-polære.

Detektorfunktionen

Detektorer varierer også afhængigt af den type HPLC-instrument, der anvendes. Men de fleste fungerer på samme grundlæggende måde. En kilde til ultraviolet lys skinner på de adskilte prøvekomponenter, når de kommer ud af søjlen. De fleste organiske forbindelser absorberer en vis mængde lys, så når de passerer den påførte lysstråle, kan en detektor afhente hvor meget lys der absorberes. Detektoren registrerer også komponenternes tilbageholdelsestid baseret på den rækkefølge, hvor de kommer ud af søjlen. Denne udgang kan derefter analyseres ud fra toppunkt for at bestemme den eksakte natur af prøveens komponenter.