Ny high-throughput screeningsmetode udviklet til ketoner

Ketoner er af stor betydning som byggesten i syntetisk organisk kemi og biokatalyse. De fleste ketoner kan ikke let analyseres kvantitativt på grund af manglen på synlige fotometriske egenskaber. Effektiv high-throughput assay (HTA) udvikling er derfor nødvendig for ketonbestemmelse.

Prof. Sun Zhoutongs gruppe fra Tianjin Institute of Industrial Biology ved det kinesiske videnskabsakademi har udviklet en kolorimetrisk metode til hurtigt at detektere strukturelt forskellige ketoner ved at bruge paramethoxy-2-aminobenzamidoxim (PMA) som en kemisk sonde.

Det PMA-baserede system tillader fluorescensscreening, der er ret følsom (op til μM rækkevidde), kompatibel med vandige systemer og bredt et pH-område. Forskellige ketoner kan bruges, især dem med elektronrige og sterisk små substituenter. Assayet, der er let at betjene, kan udføres i et pladeformat med 96 brønde ved stuetemperatur med normalt laboratorieudstyr.

Desuden, det udviklede high-throughput assay (HTA) blev med succes anvendt i den minedrift-baserede opdagelse af enzymer med øget oxidationsaktivitet mod sekundære alkoholer og i rettet udvikling af en alkoholdehydrogenase, der sigter mod at øge den katalytiske aktivitet ved hjælp af ketoner som substrater eller produkter.

Dette arbejde giver et generelt værktøj til ketondetektion i biokatalysatorudvikling.

Studiet, med titlen "A High-Throughput Fluorescence Assay for Keton Detection and its Applications in Enzyme Mining and Protein Engineering, " er blevet offentliggjort i ACS Omega .