In-situ SERS udlæsningsstrategi for individuelle celler. (A) Skematisk strategi for at forbedre pålideligheden ved at forkorte farvningstider. (B) X-gal farvning assay for celler. (C og D) In-situ SERS udlæsning. De røde og sorte trekanter markerer henholdsvis de positive og negative celler. Det blå bånd angiver markørtoppen for X-gal-hydrolysater. Kredit:LI Shaofei
For nylig, en forskergruppe ledet af prof. Yang Liangbao fra Hefei Institutes of Physical Science (HFIPS) ved det kinesiske videnskabsakademi (CAS) udviklede in-situ overfladeforstærket Raman-spektroskopi (SERS) udlæsningsstrategi for at forbedre pålideligheden af beta-galactosidase aktivitetsassay baseret på X-gal-farvning. Relevante forskningsresultater er blevet offentliggjort i Talanta.
Beta-galactosidase (β-gal) aktivitet er lukket relateret til senescensceller og ældningsassocierede sygdomme. X-gal (5-brom-4-chlor-3-indolyl-β-D-galactosid) farvning er den mest udbredte og kommercielt tilgængelige kolorimetriske analyse med billigt og ikke intensivt udstyr.
Imidlertid, traditionel aflæsning af β-gal-aktivitet baseret på X-gal-farvning er begrænset til lav følsomhed i korte inkubationstider og falske positiver i lange inkubationstider. Det er vanskeligt at opnå konsekvente positive resultater i celleproliferation, fordi cellens væksttilstand ofte ikke er homogen.
I dette studie, forskerne afslørede den uopløselige X-gal-hydrolysaters potentielle rolle i at forårsage falske positiver. X-gal hydrolysater, forårsager diffus diffusionsforurening afhængigt af organisk medium, kan guide udlæsningsstrategien som en universel undvigelsesfaktor.
Følgelig, de foreslog den følsomme og hurtige in-situ SERS-udlæsningsstrategi til at identificere og lokalisere β-gal positive celler baseret på X-gal farvning.
Denne nye strategi viste sig yderligere at være nødvendig og gennemførlig. Det løste udfordringerne ved traditionel udlæsning, og det vil være af stor betydning i forskellige anvendelser såsom aldersrelateret forskning og anti-aging terapi.