En ny metode til hurtig påvisning af et vigtigt antiviralt middel

Interferoner er proteiner, der udgør en vigtig del af vores naturlige forsvarssystemer. Disse proteiner udviser også en bemærkelsesværdig antiviral aktivitet. Det rekombinante humane interferon α2b (rhIFNα2b) blev godkendt af U.S. Food and Drug Administration i 1986. Det har været brugt lige siden som et antiviralt middel til behandling af hepatitis B og hepatitis C. På trods af dets udbredte anvendelser er der dog stadig en problem:påvisningen af ​​rhIFNα2b er kedelig og tidskrævende.

På denne baggrund udviklede forskere fra Kina i et nyt studie for nylig en ny metode til hurtig og effektiv påvisning af rhIFNα2b. Dette papir blev gjort tilgængeligt online den 8. juli 2021 og blev offentliggjort i Journal of Pharmaceutical Analysis den 30. april 2022.

For at udvikle deres nye metode, immobiliserede de en ny nanobody på en papirstrimmel. Den nanobody, der blev brugt i denne metode, stammede oprindeligt fra en alpaka - en art af det sydamerikanske kamelpattedyr. Efterfølgende blev det genereret i forskningslaboratoriet ved hjælp af rekombinant DNA-teknologi - en teknik, der bruges til at subklone DNA-fragmenter for at opnå store mængder syntetiske proteiner. Dette opnås normalt ved hjælp af bakterier eller andre prokaryote celler. En nanobody er et funktionelt fragment af et større antistof. Da det immobiliserede nye nanobody binder rhIFNα2b tæt og med høj specificitet, blev det brugt til en hurtig og idiotsikker påvisning af rhIFNα2b.

Ifølge Dr. Junzhi Wang:"På grund af fordelene ved nanobodies i reagensbevarelse, produktion og omkostninger, har lateral flow-immunokromatografianalysen ved hjælp af nanobodies et stort potentiale til at erstatte traditionelle antistofbaserede ligandbindingsassays til en hurtig identifikationstest af rekombinant proteinterapi."

Forskerholdet karakteriserede bindingen for I22-rhIFNα2b-interaktionen, dvs. binding mellem nanobody 122 og rhIFNα2b, ved hjælp af en Octet-platform. De opnåede data indikerede klart en tæt binding. Bindingsspecificiteten blev yderligere valideret ved hjælp af Western blotting, en teknik, der bruges til at detektere proteiner ved hjælp af proteinspecifikke antistoffer.

"De rhIFNα2b-produkter, der i øjeblikket er tilgængelige i Kina, omfatter injektioner, injektionspulvere, geler og pastaer. Immunkromatografistrimlerne kan kun bruges til at evaluere væsker eller produkter i pulverform, der kan opløses og påføres strimlerne. Dette skyldes, at produktet har brug for at diffundere langs strimlen via kapillærvirkning; geler og pastaer opfylder ikke dette krav," forklarer Dr. Wang.

Ganske interessant har det udviklede rhIFNa2b-detektionsassay en detektionsgrænse på 1 µg/mL, hvilket er lavere end de eksisterende grænser. Dette gør det til en mere følsom laboratoriebaseret teknik til hurtig identifikation af rhIFNα2b. En anden stor fordel er brugen af ​​nanobodies til proteindetektion. Dette skyldes, at nanobodies kan opnås på en økonomisk måde ved at høste billige bakterieceller. Desuden kan store mængder af nanobodies opnås med relativ lethed ved hjælp af rutinemæssigt anvendte laboratorieteknikker.

Dr. Wang siger:"Operationstiden for rhIFNα2b-identifikation blev forkortet fra to dage til nogle få minutter med vores test. Den kan derfor opfylde behovene for hurtig påvisning af denne familie af rekombinante proteinprodukter på markedet og give en god grundlag for at forbedre effektiviteten af ​​sporing af forfalskninger på markedet. I fremtiden vil hurtig detektion kunne udføres på en all-round måde."

Sammenfattende kan den nyudviklede metode bane vejen for en jævnere, hurtigere og præcis påvisning af rekombinante eller kunstigt genererede proteiner, hvilket giver mulighed for tidlig diagnose og behandling af hepatitis. + Udforsk yderligere

Nanobody-lægemiddelkonjugater kaprer den humane vitamin B12-optagelsesrute