Årsagen til farvning af et eksemplar på mikroskopet

Den vigtigste grund til, at du pletter en prøve, før du lægger den under mikroskopet, er at få et bedre kig på det, men farvning gør meget mere end blot at fremhæve konturerne af celler. Nogle pletter kan trænge igennem cellevægge og fremhæve cellekomponenter, og dette kan hjælpe forskere med at visualisere metaboliske processer. Pletter hjælper også med at skelne mellem levende celler og døde celler. Desuden giver farvning forskere mulighed for at tælle antallet af celler af en bestemt type inden for en bestemt biomasse. Der findes tyve eller flere forskellige typer pletter, og hver har sit formål.

TL; DR (for lang; læste ikke)

Hovedformålet med farvning er at fremhæve celler og dele af celler. Over 20 forskellige typer pletter findes, og den type plet, du bruger, afhænger af, hvad du leder efter.
Typer af pletter

Valget af plet afhænger af, hvad du leder efter. Ikke alle pletter er egnede til levende celler, men de der inkluderer Bismarck brun, toluen rød, Nile blå og Nile rød og visse fluorescerende stoffer, der bruges til at fremhæve DNA. Nogle pletter fremhæver sporer, nogle registrerer lipider og proteiner, og nogle ændrer farve i nærværelse af stivelse. Formålet med undersøgelsen bestemmer den bedste pletype, der skal bruges. F.eks. Ville en læge, der udfører en PAP-udstrygning, bruge Eosin Y. Det er et surt fluorescerende farvestof, der bliver rødt, når det kommer i kontakt med røde blodlegemer, cytoplasma og cellemembraner. Det bruges også til at teste blodmargen.

I nogle tilfælde kan en efterforsker bruge mere end en plet. F.eks. Er hæmatoxylin en plet, der gør cellekerner blå. Når det bruges sammen med eosin, der gør de andre dele af cellen rød eller lyserød, giver den en stærkere kontrast og gør kernerne lettere at differentiere. PAP-udstrygninger og blodmargsprøver er lettere at undersøge, hvornår disse to pletter bruges sammen.

Gram's Stain: Hospitalets ansatte bruger Grams plet til at identificere skadelige bakterier. Dette er faktisk en serie farvestoffer, der har forskellige effekter på forskellige typer bakterier og giver lægerne et vigtigt diagnostisk værktøj. Grams plet er en tredelt proces. I det første tilføjes Huckers krystalviolet, der farver alle bakterier en ensartet violet farve. I det næste trin tilføjes iodfarvning, hvilket får farven til at klæbe til gram-positive celler, som primært er Staphylococcus og Streptococcus. Pletten vaskes væk, hvilket efterlader de Gram-positive celler med en tydelig violet farve; derefter introduceres en tredje plet, Safranine O, for at øge kontrasten mellem de Gram-negative bakterier og resten af materialet i objektglasset.
Farvningsprocedure

Når du forbereder en prøve på et objektglas, skal du kan tørmonteres eller vådmonteres, du kan skære den i et tyndt afsnit, eller du kan smøre det ud. Når du bruger en plet, er den sædvanlige procedure at våde montering af prøven, hvilket betyder at placere en dråbe vand på objektglaset, sæt prøven i vandet og dæk den med en dækglas. Derefter påføres pletten på et hjørne af objektglasset med en dropper og lader den trækkes mod prøven ved kapillær handling. Det hjælper med at lægge et papirhåndklæde på den modsatte side af objektglasset for at tiltrække vandet. Når pletten er spredt over hele objektglasset, er prøven klar til undersøgelse.